飼料中黴菌汙染檢測方法的探討
飼料在加工、貯運過程中極易受黴菌汙染，飼料一旦黴變，不僅其營養價值會降低，適口性會破壞，而且黴菌毒素會直接危害動物和人類的健康，甚至導致死亡，因此黴菌及黴菌毒素汙染所造成的損失已引起人們的高度重視。"黴菌（mould）"不是一個分類學上的名稱，而是某些絲狀真菌的俗稱，指在基質上長成具有絨毛狀、棉絮狀或蜘蛛網狀的菌絲體的真菌，一般泛指毛黴、根黴、曲黴、青黴、鐮刀菌等屬真菌。近年來世界各國紛紛製訂黴菌及黴菌毒素的限量標準，同時加強對黴菌檢測技術的研究，並不斷完善該項技術。我國在GB13078-91中公布了對我國部分飼料原料中黴菌總數的允許量、限用量反禁用量，檢測方法依照GB13092-91，但在實際檢驗工作中，發現了不少問題。飼料生態區係具有多樣性和複雜性的特點，我國飼料中黴菌汙染又比較普遍，因此對黴菌檢測方法的研究具有重要的現實意義。本文根據檢驗中出現的問題，結合國內外有關研究的最新進展，對黴菌檢測的接種方式、培養時間等問題作幾點探討。
1??接種方式
常用的微生物接種方式主要有傾注法和塗布法兩種。目前國標方法中采用傾注法，然而有實驗和報道證實，黴菌計數采用塗布法更合適。對黴菌計數來說，塗布法有以下幾萬麵優越於傾注法：①在操作上更容易：傾注法要求將培養基熔化之後涼至45℃再注入培養皿中，但實際上在稀釋菌液的同時，很難控製溫度。如果培養基溫度太高則可能使黴菌孢子受熱損傷甚至死亡，同時如果樣品已經稀釋而培養基溫度仍很高，則有可能使稀釋液保持時間太長。如果溫度太低時傾倒，培養基會凝固。如果在大批量進行檢驗時，則更難於掌握溫度。②塗布法培養所需的時間較短，培養出的黴菌菌落數較多，黴菌孢子、菌落形態特征發育完全，便於鑒定。這是因為絕大多數黴菌是好氧的，在培養基表麵生長快，發育好，而混在培養基中發育就受影響。③由於塗布法是先倒好培養基，後接種，因而可以知道培養基是否染上雜菌。因此，黴菌計數采用塗布法既準確又省時。
2??培養時間
對飼料黴菌的檢測時間，國標中采用"培養3d後開始觀察，應培養觀察1周"。我們發現，正常培養條件下，許多樣品在培養3d後已經無法準確計數，尤其是含有生長特別快、菌絲很多的菌如毛黴、根黴、木黴等樣品和濕度較大的樣品時，則必須提早觀察記錄，在48?h以內計數，否則菌絲就會覆蓋整個平皿，無法準確計數。實驗發現，培養3～4d的菌落數與5～7d的基本相同，因此，飼料中黴菌計數，培養2d就應開始觀察，如果隻是計數，培養2～4d已基本達到目的，但如果還要進一步分類鑒定，則需要培養更長的時間（?7～14?d）。
3??培養基
國標中黴菌檢測使用的是高鹽察氏培養基（CAO），這種培養基僅適合於高滲性黴菌生長，所以嚴格說來，在此培養基中生長的菌數並不是真正的黴菌總數。但由於飼料中產生毒素的真菌，主要是曲黴屬、青黴屬和鐮刀菌屬，其中許多菌種是適應高滲的，因此，選用高鹽察氏培養基還是具有一定代表性的。有時為了確切地反映樣品中真菌的全貌，還可同時選用低滲性培養基，如馬鈴薯葡萄糖培養基；為了分離某種類型或特定的產毒真菌，也可用選擇性培養基。