連翹炮製工藝研究
製劑與炮製
作者：薑濤 許佳 秦臻 陳廷貴 範聖此 張立偉
[摘要] 目的：探討不同炮製方法對連翹主要化學成分含量及活性等指標的影響，為連翹的合理炮製提供依據。
方法：采用《中國藥典》浸出物測定法測定浸出物含量；用HPLC法分析比較不同炮製條件對連翹化學成分含量的影響；用DPPH清除自由基法評價抗氧化作用；通過對金黃色葡萄球菌的抑菌效果評價抗菌作用。
結果：綜合考慮各因素的影響，確定的最佳水煮炮製條件為，加6倍水，沸水煮8 min。
結論：不同炮製條件下連翹中化學成分含量及活性等有明顯不同。
[關鍵詞] 連翹；炮製；連翹酯苷；抗氧化
連翹為木犀科連翹屬植物連翹Forsythia suspense（Thunb.）Vahl的幹燥果實，具有清熱解毒，消腫散結，疏散風熱之功效，常用於風熱感冒、溫病初起、溫熱入營等[1]。連翹中主要含苯乙醇苷類、木脂素及其苷類、五環三萜類、黃酮類、揮發油類等成分[2]。現代藥理研究表明，連翹具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抑製磷酸二酯酶、抑製彈性蛋白酶活力、抗內毒素、抗肝損等多種藥理作用[3]。目前關於連翹炮製方麵的報道較少，且炮製方法不統一，生產水平低，生產過程沒有嚴格的控製標準，有關炮製工藝的研究僅根據幾種主要化學成分的含量高低作為判斷炮製品的優劣[4，5]，這種評價方法存在一定的缺陷。因此，本試驗在考察連翹中化學成分變化基礎上，增加了浸出物量和活性考察指標，係統研究了連翹炮製工藝條件，期望為連翹炮製方法提供較為科學的依據。
1 材料
Agilent 1200高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；OHAUS CP114電子天平（奧豪斯儀器有限公司）；HP8453 UV，Vis吸收光譜儀（美國惠普公司）。
連翹苷、連翹酯苷A對照品均購於中國食品藥品檢定研究院，批號分別為，，，，DPPH購於上海索萊寶生物科技有限公司；乙腈（色譜純，天津市科密化學試劑開發中心），冰醋酸（色譜純，天津市科密化學試劑開發中心），所用水為娃哈哈純淨水，其他試劑均為分析純；連翹於2011年8月和2012年8月采摘於山西大學校園，經山西大學秦雪梅教授鑒定為木犀科連翹屬植物連翹Forsythia suspense的果實。
2 方法
2.1 正交試驗
參照2010年版《中國藥典》炮製通則，取新鮮連翹200 g，分別裝入尼龍網兜，放入恒溫水浴鍋中，考察炮製時間、炮製溫度、加水量3個因素的影響，每個因素取3個水平，按照正交設計L9（34）進行試驗（表1）。炮製後，平攤在紙上，陰幹。
表1 連翹炮製正交試驗因素水平表
Table 1 Factors and levels in orthogonal design
2.2 外觀性狀
對不同炮製條件下樣品的外形（長短、直徑），表皮顏色、性狀、氣味、味道等進行比較。
2.3 浸出物含量測定
參照2010年版《中國藥典》一部附錄XA項下冷浸測定法，稱取連翹粉末4 g，置250 mL錐形瓶中，精密加65%乙醇100 mL，密塞，冷浸，前6 h振搖，再靜置18 h，用幹燥濾器迅速濾過，精密量取濾液20 mL，置幹燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸幹，再於105 ℃幹燥3 h，置幹燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質量，以幹燥品計算供試品中醇溶性浸出物的質量分數。
2.4 指標成分含量測定
2.4.1 測定波長選擇 連翹酯苷A在216，245，290，332 nm有4個吸收峰，連翹苷在229，279 nm有2個吸收峰，連翹酯苷A和連翹苷在230 nm吸收強度均較大，因此初步確定檢測波長為230 nm，此波長下，各個色譜峰分離度好，基線平穩。
2.4.2 色譜條件考察 Agilent ZORBAX SB，C18色譜柱（4.6 mm×250 nm，5 μm）；流動相乙腈（A），0.3%醋酸溶液（B），梯度洗脫，0～5 min，85%～83%A，5～10 min，83%～80%A，10～15 min，80%～77%A，15～20 min，77%～75%A，流速0.8 mL·min-1；柱溫25 ℃；波長230 nm。
2.4.3 對照品溶液的製備 取連翹酯苷A對照品，精密稱定，加甲醇製成每1 mL含0.1 mg的對照品溶液，臨用配製，避光。取連翹苷對照品，精密稱定，加甲醇製成每1 mL含0.2 mg的對照品溶液。
2.4.4 供試品溶液製備 取本品粉末（過3號篩）約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇30 mL，稱定重量，超聲處理30 min（250 W，40 kHz），放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液0.8 mL，置於5 mL量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，即得供試品溶液。
2.4.5 標準曲線及線性範圍考察 配製不同濃度的混合對照品溶液。精密吸取混合對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，平行進樣2次，以進樣量（X）對峰麵積（Y）進行回歸，連翹酯苷A回歸方程為Y=15 490X+229.95，R2 = 0.999 0，線性範圍0.082 4～0.618 g·L-1；連翹苷回歸方程為Y=37 417X-90.162，R2 =0.999 1，線性範圍0.010 67～0.085 3 g·L-1。