不同濃度七氟醚對人鼻咽癌細胞株CNE2黏附能力以及CD133表達的影響
論著
作者：李超 胡嘯玲 曠昕等
[摘要] 目的觀察不同濃度七氟醚對人鼻咽癌細胞株CNE2黏附能力、CD133表達的影響。方法分為四組：對照組（Control組）、1.7%七氟醚組（Treat1組）、3.4%七氟醚組（Treat2組）和5.1%七氟醚組（Treat3組）。Treat1組、Treat2組和Treat3組人鼻咽癌CNE2細胞，經1.7%、3.4%、5.1%七氟醚作用2 h、4 h、6 h。檢測細胞黏附率；采用qRT-PCR法檢測CD133的mRNA表達。結果與處理前比較，Treat1組、Treat2組和Treat3組處理2 h、4 h和6 h時細胞黏附率降低，CD133的mRNA及其蛋白表達下調（P
[關鍵詞] 麻醉藥，吸入；細胞黏附；CD133
[中圖分類號] R614 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2013）27-0001-02
七氟醚於1968年由Regan合成，1986年完成1期臨床試驗，1990年首先由日本的藥監部門批準臨床使用。近年來，被許多著名麻醉學專家譽為吸入麻醉的裏程碑式藥物。研究表明，七氟醚可抑製結腸癌細胞和喉癌細胞的生長以及肺癌細胞的黏附[1，2]，但七氟醚對人鼻咽癌細胞株黏附能力的影響尚不明確。CD133能在多種腫瘤細胞係中被檢測到，並被證實表達CD133表型的腫瘤細胞是人類腦腫瘤、胃癌、肝細胞癌、結直腸癌、前列腺癌、黑色素瘤、胰腺癌等實體腫瘤中的幹細胞，參與腫瘤的侵襲轉移[3-5]。本研究擬評價七氟醚對人鼻咽癌細胞株CNE2黏附能力、CD133表達的影響，現報道如下。
1 材料與方法
1.1 主要試劑與儀器
人鼻咽癌細胞株CNE2（南華大學研究所），RPMI 1640培養基、10%胎牛血清（Hyclone公司，美國），麻醉氣體監測儀（Datex AS/3公司，芬蘭），AestivaR/5型麻醉機（Datex Ohmeda公司，芬蘭）。
1.2 細胞培養
CNE2細胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養基於37℃、5%CO2、飽和濕度培養箱中培養。
1.3 實驗分組
取對數生長期的人鼻咽癌CNE2細胞，采用隨機數字表法將其隨機分為四組：對照組（Control組）、1.7%七氟醚組（Treat1組）、3.4%七氟醚組（Treat2組）和5.1%七氟醚組（Treat3組）。
1.4 細胞黏附實驗
分別處理好細胞將100 μL細胞懸液加入96孔板中，繼續培養1 h。每孔加入200 μL PBS，振搖5 min，洗2遍。棄PBS後加入MTT，於波長490 nm處，用酶標儀測定吸光度值，並計算黏附率=[（各實驗孔黏附細胞吸光度值/對照孔黏附細胞吸光度值-1）×100%]。
1.5 CD133 mRNA表達的測定
采用qRT-PCR法測定CD133 mRNA的表達，qRT-PCR反應：反應體係為20 μL，包括稀釋後的RT產物2 μL、2×qRT-PCR緩衝液10 μL、5 μmol/L miR-155特異性PCR引物0.4 μL、5 U/μL耐熱DNA聚合酶0.2 μL、滅菌雙蒸水7.4 μL。反應條件：先95℃ 3 min活化Taq酶，然後95℃ 12 s、62℃ 35 s，共40個循環。