Scorpions—ARMS法檢測非小細胞肺癌患者外周血EGFR基因突變及其臨床預測價值的研究
論著
作者：陸華東等
[摘要] 目的 應用蠍形擴增阻滯突變係統（Scorpions-ARMS）檢測非小細胞肺癌患者外周血EGFR基因突變及其臨床預測價值的研究。 方法 應用蠍型擴增阻滯突變係統（Scorpions-ARMS）檢測非小細胞肺癌外周血中EGFR基因第18、19、20及21外顯子突變，統計分析EGFR基因突變的相關因素。結果 50例非小細胞肺癌患者中，EGFR基因的突變率為30%（15/50）。 結果 EGFR基因的突變率47.4%（女性）明顯高於19.4%（男性）。非吸煙患者EGFR突變率45.5%高於吸煙患者 17.9%，差異有統計學意義（P = 0.035）。在非小細胞肺癌患者中，腺癌患者EGFR 突變率40.6%明顯高於非腺癌患者11.1%，差異有統計學意義（P = 0.029）。 結論 Scorpions-ARMS是檢測血清遊離DNA中EGFR基因突變的可靠有效方法。
[關鍵詞] 非小細胞肺癌；基因突變；表皮生長因子受體；蠍形擴增阻滯突變係統
[中圖分類號] R734.205 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）14-0001-02
肺癌是當今世界各國最常見的惡性腫瘤之一，是導致人類死亡的首要疾病和主要原因。由於初期肺癌患者缺乏明顯的臨床症狀，近75%患者在進行首診時病變已屬晚期，失去根治性手術的機會。然而姑息性手術或輔助性治療僅能部分改善症狀，並未起到改善症狀以及延長生命的作用[1]。吉非替尼和厄洛替尼等表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑製劑可選擇性地抑製EGFR酪氨酸激酶區的活化，阻斷EGFR信號轉導通路，可用於至少一次化療失敗後的局部晚期或轉移性非小細胞肺癌的治療。研究顯示，EGFR基因突變狀態能夠預測EGFR-TKIs的治療效果[3，4]。
近年來大量研究表明，外周血EGFR與組織EGFR兩者突變檢測具有較高的一致性，因此用外周血檢測EGFR基因突變情況是切實可行的，並可以實時監測疾病進展，較早發現獲得性耐藥，以給予更好的治療與預防[5-8]。目前，外周血EGFR突變檢測方法主要有變性高效液相色譜法（DHPLC）、突變富集PCR、蠍形擴增阻滯突變係統（Scorpions-ARMS）以及微流體數字PCR技術等[9-11]。
Scorpions-ARMS因其具有高靈敏性和特異性，且操作簡單快速，可作為檢測EGFR突變的新型定量PCR方法。文獻報道使用Scorpions-ARMS方法測定晚期肺癌患者血清和腫瘤組織EGFR基因檢測的一致性可達到72.7%[12，13]。因此本研究采用敏感性高的Scorpions-ARMS技術，選擇易於采集並能準確反映腫瘤組織狀態的外周血作為標本進行研究。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
2011年6月～2012年6月我院收治並接受手術治療的NSCLC患者50例。年齡25～78歲，中位年齡60歲；28例有吸煙史；根據ICC2009年新的第七版修訂標準進行TNM分期，III期29例，IV期21例；按WHO肺癌組織分類標準進行組織分型，腺癌32例，鱗癌15例，大細胞肺癌2例，肺泡癌1例。
1.2 標本獲取
取得患者及其家屬知情同意後，清晨空腹抽取患者外周靜脈血5 mL置於潔淨EDTA抗凝管中，-80℃冰箱凍存備用。
1.3 DNA的提取
外周血DNA提取按照QIAGEN試劑盒說明進行。
1.4 Scorpions-ARMS檢測EGFR基因突變
對提取的DNA進行EGFR基因突變檢測采用DxS公司EGFR 29 Mutation Kit試劑盒和IQ5實時熒光定量PCR儀，按照DxS試劑盒的說明書步驟進行操作，對患者進行必要的結果觀察。