第十節 實驗動物體液、骨髓的采集方法
一、實驗動物尿液的采集
常用的尿液收集方法有代謝籠法、導尿管法、剖腹采尿法等，為了便於尿液采集，一般在實驗前一定時間給動物灌服一定量的水或使動物有一定水負荷。
1.代謝籠法此法適用於大鼠和小鼠，將動物放在特製的籠內，動物排出的大便，可通過籠子底部的大小便分離漏鬥將尿液與糞便分開，達到收集尿液的目的。由於大、小鼠尿量較少，各鼠膀胱排空不一致，一般需收集2～5h或更長時間內的尿排出量，為避免實驗中尿液的蒸發和損失而導致較大的實驗誤差，尿液收集管和收集瓶最好連接後密封，實驗室溫度以20℃左右為好，為了收集到較多尿液減少誤差，多在實驗前給大小鼠灌服一定量的水（生理鹽水）或腹腔注射一定量的生理鹽水。一般大鼠5ml/100g灌服，或2ml/100g 腹腔注射，小鼠灌服0.3～0.5ml/10g。
2.導尿管法常用於雄性兔和犬。一般用2kg以上雄兔，按30～60ml/kg給兔灌水，1h後用25%烏拉坦溶液4ml/kg耳靜脈麻醉，將兔固定於兔台上，由耳靜脈以恒速（用小兒頭皮靜脈針及恒速靜脈輸注裝置，恒速為2ml/min）注入5%葡萄糖生理鹽水，由尿道插入導尿管（頂端應先用液體石蠟塗抹），並壓迫下腹部排空膀胱。然後收集正常尿，給藥後再收集尿。在收集尿液期間應經常轉動導尿管。犬的尿液收集法可參照兔的尿液收集方法。
3.壓迫膀胱法有些動物實驗，為了某種實驗目的，要求間隔一定的時間，收集一次尿液，以觀察藥物的排泄情況。動物輕度麻醉後，實驗人員用手在動物下腹部加壓，手要輕柔而有力。當加的壓力足以使動物膀胱括約肌鬆弛時，尿液就會自動由尿道排出。此法適合於家兔、貓、犬等較大動物。
4.輸尿管插管法動物麻醉後（一般用犬等較大動物），固定於手術台上，剪毛、消毒，於恥骨聯合上緣之上在正中線做皮膚切口（長3～4cm），沿腹白線切開腹壁及腹膜，找到膀胱翻出腹外，辨認清楚輸尿管進入膀胱背側的部位（即膀胱三角）後，細心地分離出兩側輸尿管，分別在靠近膀胱處穿線結紮，在離此結紮點約2cm處的輸尿管近腎段下方分別穿一根絲線，用眼科剪在管壁上剪一斜向腎側的小切口，分別插入充滿生理鹽水的細塑料管（插入端剪成斜麵）用留置的線結紮固定，可見到尿滴從插管中流出（頭幾滴是生理鹽水），塑料管的另一端與帶刻度的容器相連或接在記滴器上，以便記錄尿量。在實驗過程中應經常活動一下輸尿管插管，以防阻塞。在動物切口和膀胱處應以溫濕的生理鹽水紗布覆蓋。
5.膀胱瘺管法一般用犬等較大動物，麻醉後固定於手術台上，無菌操作在下腹部做手術剪口，長為6～8cm，從切口處取出膀胱，將金屬套管插入膀胱，套管應當用小型而其底的邊緣應向下翻成杯狀，以免當膀胱縮小時損傷膀胱壁。用粗線在膀胱體部的前壁穿過肌肉層做一橢圓形荷包縫線。在荷包縫線下麵用手夾住膀胱體部，然後順著荷包口縫成的長軸切開膀胱，兩端保留長3～4mm的邊緣。用小鉤鉤住切口的兩端，將套管底盤插入膀胱腔內，隨著把荷包口縫線結紮緊，其次，將套管固定在腹壁切口上，同時縫合腹壁切口。平時用套管塞塞住瘺管口，實驗時將其打開，用橡皮帶將一漏鬥綁到膀胱瘺管上，漏鬥下麵放小瓶收集尿液。
6.穿刺膀胱法動物麻醉後固定於手術台上，在恥骨聯合之上腹正中線剪毛，消毒後進行穿刺，入皮後針頭應稍改變一下角度，以免穿刺後漏尿。
7.剖腹采尿法同穿刺法做術前準備，皮膚準備範圍應大一點，剖腹暴露膀胱，用無齒小平鑷夾住一小部分膀胱壁，然後將針在小鑷夾住的膀胱部位直視穿刺抽取尿液。抽尿時應避免針頭貼在膀胱壁上而抽不出尿液。
8.反射排尿法適用於小鼠，如需采取少量尿液時，可提起小鼠，將小鼠排出的尿液吸取供實驗用。因小鼠被人抓住尾巴提取時排便反射比較明顯，也可抓取小鼠引起小鼠反射排尿。
二、實驗動物膽汁的采集
1.膽囊瘺管法挑選胸廓寬廣平坦的犬做實驗，麻醉後做腹壁切口，由劍突起沿中線向下切開8～10cm。結紮總膽管前，須先剝離出約1.5cm，在剝離段的兩極端各用一線結紮，再在兩結紮間把總膽管切去約1cm，以防總膽管再行接通，用紗布剝離法把膽囊和肝組織分離，直到膽囊管為止。處理膽囊有2種方法，一種是安置一個金屬套管於膽囊內，通過腹壁上的切口引至腹壁外；另一種是把膽囊底固定於腹壁筋膜，直接開口於皮外。插一直徑約1cm 的短橡皮管於膽囊腔內，再以兩根絲線把橡皮管固定好，此橡皮管為短時間引流用，6～7天後可取去。最後縫合腹壁中線切口。
術後應注意引流通暢，收集膽汁時，使犬站立在架上，用7cm長的橡皮管插入膽囊，外麵罩以玻璃漏鬥（漏鬥柄內經與橡皮管外徑相當），橡皮管的下端穿過漏鬥柄通入試管內。膽瘺管傷口周圍的膿樣黏液可存積於漏鬥上，不混入膽汁中。
2.總膽管插入法大鼠急性實驗；大鼠灌2.5ml生理鹽水，用1.2g/kg烏拉坦腹腔注射麻醉，然後將大鼠仰臥固定。腹部正中線剃毛後切開皮膚及腹膜2cm，從幽門向下找到十二指腸乳頭部，再追蹤總膽管，輕輕剝離，從總膽管下麵穿過2根細線，將靠近乳頭部的線紮牢固定，將充滿生理鹽水的頭皮針管向肝髒方向插入總膽管，用另一根線紮牢，確認有膽汁流出後用橡皮膠布將塑料管固定，由此管收集膽汁。頭皮針插入總膽管後，注意勿使其扭曲，以免影響膽汁引流不暢。
犬慢性實驗，犬麻醉後，在右側腹直肌上切開腹壁，尋出膽囊和總膽管，靠近十二指腸結紮總膽管，切除膽囊或將它隔離任其萎縮，即在膽囊的頸部用2根絲線結紮，並在兩結紮間切斷。再抽出膽囊中的膽汁，膽囊即逐漸萎縮，插入總膽管所用套管是用玻璃做成，一端較尖，並且在尖端有凸出的邊緣，便於插入總膽管內，另一端連接一條軟膠管，其次為一個“U”形玻璃管再接一個硬橡膠管，穿出腹壁外，橡皮管在體外的一端則先通過一個“T”形管，一端連續一個橡皮囊以收集膽汁，另一端則連接於一段短橡皮管作為自由開口。用普通插套管方法將套管插入總膽管內，用中等粗的絲線結紮2次，然後在套管下將總膽管切斷。硬橡皮管在腹壁上的開口，是做在近右肋骨下緣的乳頭線上，並且要做成斜的，最後縫合腹壁切口。手術完畢後，用布將橡皮囊及紗布包好，取膽汁時打開此布包，通過“T”形管自由端將膽汁從橡皮囊中抽出，再換以消毒棉花紗布。
3.用十二指腸瘺管收集膽汁法犬麻醉後，沿中線切開腹壁，由總膽管入十二指腸的開口周圍尋出胰腺小導管，結紮並切斷。然後在十二指腸上正對著的總膽管開口處做一縱切口，對準該開口安置一相當大小的瘺管套管，套管的直徑約1.7cm，隨即在腹壁右側做一個穿透切口，將套管通到皮外，用套管塞將管口塞緊，最後縫合腹壁切口。收集膽汁時，使犬站在犬架上，將套管塞打開，即開始收集膽汁。
三、實驗動物胰液的采集
在動物實驗中，主要是通過胰總管的插管而獲得胰液，犬的胰總管開口於十二指腸降部，在緊靠腸壁處切開胰管，結紮固定並與導管相連，即可見無色的胰液流入導管。犬的麻醉、解剖同膽汁收集法。
大鼠的胰管與膽管彙集於一個總管，在其入腸處插管固定，並在近肝門處結紮和另行插管，即可收集到胰液。也可通過製備胰瘺來獲得胰液。
四、實驗動物淋巴液的采集
淋巴液的采集比較困難，一般主要采集大動物的淋巴液，常用的大量收集淋巴液的方法是解剖出胸導管後插管收集淋巴液。
以大鼠為例，取成年雄性大鼠、麻醉、固定、消毒、從劍突起沿其左側肋緣向下外方做一長約5cm的切口，再從劍突向下做正中切開，暴露橫膈與腹主動脈，胸導管緊貼在腹主動脈的左後側，在胸導管上剪一斜口，將塑料插管的頂端插入，即可見乳白色的淋巴液流出。
五、實驗動物唾液的采集
犬頜下腺排泄管插管法：犬經麻醉後仰臥固定在手術台上，向後肢靜脈內插入一靜脈插管，需要時可通過插管進行追補麻醉。由下頜部開始進行頸部剃毛，做皮膚切開，找到頜下腺排泄管、舌下腺排泄管、舌神經及鼓索神經。在頜下腺排泄管上切一小口，然後插入聚乙烯管，固定結紮，在舌神經頭端結紮、切斷，保留鼓索神經。當刺激舌神經外周端時有唾液流出。為便於觀察刺激引起的唾液在管內上升的高度，可在管的末端注入紅墨水等帶色液體。
六、實驗動物陰道液的采集
1.棉拭子法用消毒棉拭子旋轉插入動物陰道內，然後在陰道內輕輕轉動幾下後取出，即可進行塗片鏡檢，有的實驗動物如大、小鼠等，其陰道液較少，取其陰道液時，可用先浸濕後又擠盡無菌生理鹽水的棉拭子取陰道液，這種棉拭子比幹棉拭子容易插入陰道。對體形較大的實驗動物，也可先按摩或刺激其陰部，而後再采集其陰道液。
2.滴管法用已消毒的鈍頭滴管吸取少量無菌生理鹽水插入動物陰道內，然後擠出生理鹽水後又吸入，這樣反複幾次後，吸取陰道衝洗液滴於玻片上塗片、染色、鏡檢。
七、實驗動物精液的采集
1.人工陰道采集精液體形較大的實驗動物，如犬、豬、羊等，可用一專門的人工陰道套在發情的雄性動物陰莖上，采集精液。也可將人工陰道置入雌性動物陰道內，待動物交配完畢後，取出人工陰道采集精液。還可將人工陰道固定在雌性動物外生殖器附近，雄性動物陰莖開始插入時，立即將其陰莖移入人工陰道口，待其射精完畢後采集人工陰道內的精液。
2.陰道栓采集精液大、小鼠雌雄交配後，24h內可在雌性動物陰道口出現白色透明的陰道栓，這是雄鼠的精液和雌鼠陰道分泌液在陰道內凝固而成的，取陰道栓塗片染色可觀察到凝固的精液。
3.其他采集精液法將發情的雌性動物放在雄性動物當中，當雄性動物被刺激發情後，立即將雄性動物分開，再用人工法刺激其射精。也可通過按摩雄性動物的生殖器或用電刺激其發情中樞或性敏感區，使其射精。
八、實驗動物前列腺液的采集
對於體形較大的實驗動物，可用手按摩雄性動物前列腺部位，使腺體分泌來采集前列腺液。
九、實驗動物乳汁的采集
1.人工按摩法用手撫摩哺乳期動物的乳頭，可使乳汁自動流出，也可朝乳頭方向加壓按摩動物乳房，可擠出大量乳汁。
2.吸奶器吸奶法采用吸奶器吸在動物乳頭上，造成負壓使乳汁被動吸出。
十、實驗動物糞便的采集
小動物用動物代謝籠，即可采集尿又可采集糞便，大動物如猴、犬則可圈養，選擇新鮮大便，收入潔淨容器內，取內層糞便分析。
十一、實驗動物骨髓的采集
大動物骨髓采集法與人的骨髓采集法很相近，多采取活體穿刺取骨髓的方法，一般取胸骨、肋骨、髂骨、脛骨和股骨的骨髓（這些部位是有造血功能的骨組織）。對於小動物因體形小，骨骼小，不易穿刺，一般采用處死後由胸骨或股骨采集骨髓供實驗用。
1.大鼠、小鼠骨髓的采集動物脫臼處死後，解剖剝離出胸骨或股骨，用注射器吸取一定量的Hank’s液衝洗出胸骨或股骨中的全部骨髓液備用。如取少量骨髓做檢查，可將胸骨或股骨剪斷，將其斷麵的骨髓擠在有稀釋液的玻片上，也可用針頭插入骨髓腔後取出骨髓，將骨髓移到有（同種動物）血清的玻片上，混勻後塗片晾幹即可染色檢查。