可能最開始的時候是張興教授把陸成交給了他讓他來帶陸成做實驗的,但是可能最後陸成已經把好多操作都學完了,他都還沒有開始教的機會。
這就沒辦法證明自己是真的很厲害的這個事實了,畢竟在臨床上的時候,山原齊木自己就被擠下去過,這個事情他可是還沒告訴任何人的。
當然還是覺得有那麼一些丟人,想從另外一個層麵找回點自信。
但是陸成也是華國人,他根本搶不過秦霜,然後呢,秦霜交給了他實驗之後,就似乎開始顯露了他那該死的實驗天賦了。
山原齊木也隻能最終接受了這個很‘殘酷’事實,繼續到當前的實驗方案之中了。
其實山原齊木心裏還有一個比較鬱悶的問題就是,為啥我也是做WB,肯尼師兄也是做WB,陸成就不知道選我呢?
……
在開始和肯尼師兄學習實驗之前,陸成心裏默默地回憶了一遍自己理解的WB技術的全流程。
WB的全稱叫WesternBlot,也就是蛋白質印記。是用特異性抗體檢測細胞內特異性蛋白質的重要方法之一。
蛋白質印跡則是把電泳分離的蛋白質轉移到固定基質上,然後利用抗原抗體反應來檢測特異性的蛋白分子的技術。
它可以分成以下幾個部分。
第一個首先就是要得到蛋白質,蛋白質就在細胞內,將其徹底剪碎並且把細胞裂解開得到細胞內基質液,液體中,就含有了大量的蛋白質。
然後我們要篩選並且標記出我們需要的蛋白質,就好像是從無數的人海中挑選萬中無一的最適合傳承的人一樣,需要進行篩選。
篩選目標蛋白的過程,就需要依靠電泳來實現了,
因為我們知道蛋白質在溶液中的時候,通過調節溶液的PH值,就可以調整蛋白質的帶電狀態,使其帶正電荷或者負電荷。
如此一來,我們隻需要提前查詢到目標蛋白質的等電點的PH值,就可以輕易地將其調整成需要的帶電狀態,然後將這個PH值的所有帶正電荷的蛋白質與帶負電荷的蛋白質分離開。
因為假如目標蛋白帶正電荷,那麼它在電場中的運動方向必然是與電場方向一致的,而帶負電荷的便正好與之相反。
這樣才隻是第一步的分離,
雖然這一步還有很多其他的蛋白質也可能帶正電荷,與目標蛋白同方向移動,但是,在運動的過程中,因為蛋白質的帶電電荷與質量的差異,就可以讓不同質量和不同電荷的蛋白質,在時間的堆積之下,
產生移動距離的差異,從而使得幾乎相同的蛋白質,移動的大概距離一致,產生一條蛋白帶。
而這條蛋白帶子,其實是透明的,而且還可能夾雜有其他的蛋白,
那麼接下來就需要最後的關鍵一步了,那就是在帶子上,接受特異性抗體的衝洗,將目標蛋白進行標記。
標記之後,會產生有色的條帶。
這個時候,我們便可以通過目測蛋白條帶的寬度和顏色的深度不一致,從而將不同實驗組別內細胞內含有目標蛋白的蛋白質的總含量給計區別開。
顏色較深,且條帶較為寬的,就含量越高,顏色淺,條帶窄的自然含量就少了……
這樣的測定,叫蛋白含量多少的定性測定。
與此同時,我們還可以對其進行定量測定,那就是,假如我們人為地通過放置不同濃度的蛋白質,然後在電泳中製作一條標準蛋白的曲線。
然後再拿我們目標蛋白電泳之後的蛋白帶的寬度和濃度與標準蛋白曲線作對比,就可以定量實驗組和對照組中目標蛋白的具體質量。
……
這個實驗的目的,就是為了檢測,在我們做實驗的過程中,通過影響了相應的基因,是否會對最終的蛋白表達產生影響。
畢竟,幾乎所有基因調控最終反映在細胞上的基本要素,都是蛋白質的改變。
比如說某一種酶的含量增加或減少,然後因為酶的減少導致下遊產物的減少,來控製我們需要達到的正常細胞狀態。
就像是在腫瘤細胞中一樣,我們可以通過基因的改變,調控其對葡萄糖的攝取量和葡萄糖進入無氧糖酵解的量,從而限製腫瘤細胞的能量供應,