將菌體液用一支幹的滴管吸放數次,使細胞均勻分散。立刻吸取一滴於計數板上,然後將蓋玻片輕輕由一邊向另一邊壓下,再用兩隻手的拇指緊壓蓋玻片兩邊,使蓋玻片與計數板完全密合。注意不能有氣泡。數分鍾後,待全部菌體細胞沉降到玻璃片表麵,放在高倍鏡下計數。計數時在16×25的計數板上隻計板上四個角上的四個大格(即100個小格)的菌體數,如果在25×16的計數板,除計四個角上的四個大格外,還須統計中央一大格的菌體數目(共五個大格即80個小格)。
每個樣品重複計數三次,取其平均值,計算每毫升菌體液內所含的菌體細胞數。
附錄3 活細胞率檢驗
1. 原理
樣品加美藍染色劑溶液稀釋後,加入血球計數板內,通過顯微鏡直接計數法,分別測出計數室內細胞的活率。未染上色或色較淡者為活細胞,染上色的為死細胞。
2. 儀器和試劑
①血球計數板;②生物顯微鏡;③天平(感量≤0.1克);④美藍染色劑;⑤95%乙醇;⑥10%氫氧化鉀溶液。
3. 方法與步驟
(1)稱取美藍染色劑2克,溶於95%乙醇定溶100毫升,取該溶液30毫升,用蒸餾水稀釋至100毫升,滴加0.1毫升10%氫氧化鉀溶液。
(2)在被稀釋1000倍的菌液樣品中加入2滴美藍染色稀釋劑,攪勻,吸取樣品在顯微鏡下計數,分別計活細胞和死細胞。
將菌體液用一支幹的滴管吸放數次,使細胞均勻分散。立刻吸取一滴於計數板上,然後將蓋玻片輕輕由一邊向另一邊壓下,再用兩隻手的拇指緊壓蓋玻片兩邊,使蓋玻片與計數板完全密合。注意不能有氣泡。數分鍾後,待全部菌體細胞沉降到玻璃片表麵,放在高倍鏡下計數。計數時在16×25的計數板上隻計板上四個角上的四個大格(即100個小格)的菌體數,如果在25×16的計數板,除計四個角上的四個大格外,還須統計中央一大格的菌體數目(共五個大格即80個小格)。
每個樣品重複計數三次,取其平均值,計算每毫升菌體液內所含的菌體細胞數。
附錄3 活細胞率檢驗
1. 原理
樣品加美藍染色劑溶液稀釋後,加入血球計數板內,通過顯微鏡直接計數法,分別測出計數室內細胞的活率。未染上色或色較淡者為活細胞,染上色的為死細胞。
2. 儀器和試劑
①血球計數板;②生物顯微鏡;③天平(感量≤0.1克);④美藍染色劑;⑤95%乙醇;⑥10%氫氧化鉀溶液。
3. 方法與步驟
(1)稱取美藍染色劑2克,溶於95%乙醇定溶100毫升,取該溶液30毫升,用蒸餾水稀釋至100毫升,滴加0.1毫升10%氫氧化鉀溶液。
(2)在被稀釋1000倍的菌液樣品中加入2滴美藍染色稀釋劑,攪勻,吸取樣品在顯微鏡下計數,分別計活細胞和死細胞。