清室後裔、書法家啟功指出，其曾祖父、時任禮部尚書的溥良曾經親眼看到太監從病重的慈禧宮中傳出一個蓋碗，稱“是老佛爺賞給萬歲爺的塌喇”。“塌喇”在滿語中是優酪乳之意。在這之前，人們從來沒有聽說過光緒帝有任何急症大病。當優酪乳送後不久，就由隆裕皇後的太監小德張（張蘭德）向太醫院正堂宣布光緒皇帝駕崩了。隨後樂壽宮才哭聲四起，宣布太後已經死去。慈禧太後與光緒帝素有嫌隙，況且當時慈禧太後已經處於彌留之際，此時派人給軟禁中的光緒帝送吃的，極不尋常。啟功認為，慈禧太後可能先於光緒帝已經病死，但秘不發喪，直到確認光緒帝死亡後才對外公布死訊。
也有人認為，慈禧太後自戊戌政變以後就陰謀廢黜及弑害光緒帝，更擔心光緒帝會在自己死後複位翻案，所以才會在病危之時下毒手。
袁世凱說
稱光緒帝是袁世凱所殺的人認為，袁世凱負恩反戈，陷光緒帝於萬劫不複的境地。袁世凱既然知道光緒帝對自己已經深惡痛絕，則不能不懼慈禧太後死後而皇帝獨生，故加以謀害（見於光緒侄、末帝溥儀所著《我的前半生》及其他）。但當時袁世凱已經被開缺回籍，遠在河南的安陽，而且按照清宮內廷的製度，任何從宮外送入禦用的食物必須先經人試毒。因此即使袁世凱有動機，也不大可能有機會對光緒帝下毒手。袁世凱更不可能再有機會篡改清實錄和脈檔，製造光緒帝病死的假象。
還有人認為，當時除了慈禧太後外，並無其他人具備指使對皇帝下毒的能力。
李蓮英說
曾擔任慈禧禦前女官的裕德齡在其英文版自述《瀛台泣血記》中提出，對光緒帝下手的人應該是李蓮英。但這種說法頗不合李蓮英素常“侍上以敬，待下以寬”的行跡。也無任何其他史料支持。
光緒帝的墳墓（清西陵的崇陵）曾經被打開，後來清理封閉，留下若幹頭發、遺骨和衣服等由該處妥善保存。
清室後裔、書法家啟功指出，其曾祖父、時任禮部尚書的溥良曾經親眼看到太監從病重的慈禧宮中傳出一個蓋碗，稱“是老佛爺賞給萬歲爺的塌喇”。“塌喇”在滿語中是優酪乳之意。在這之前，人們從來沒有聽說過光緒帝有任何急症大病。當優酪乳送後不久，就由隆裕皇後的太監小德張（張蘭德）向太醫院正堂宣布光緒皇帝駕崩了。隨後樂壽宮才哭聲四起，宣布太後已經死去。慈禧太後與光緒帝素有嫌隙，況且當時慈禧太後已經處於彌留之際，此時派人給軟禁中的光緒帝送吃的，極不尋常。啟功認為，慈禧太後可能先於光緒帝已經病死，但秘不發喪，直到確認光緒帝死亡後才對外公布死訊。
也有人認為，慈禧太後自戊戌政變以後就陰謀廢黜及弑害光緒帝，更擔心光緒帝會在自己死後複位翻案，所以才會在病危之時下毒手。
袁世凱說
稱光緒帝是袁世凱所殺的人認為，袁世凱負恩反戈，陷光緒帝於萬劫不複的境地。袁世凱既然知道光緒帝對自己已經深惡痛絕，則不能不懼慈禧太後死後而皇帝獨生，故加以謀害（見於光緒侄、末帝溥儀所著《我的前半生》及其他）。但當時袁世凱已經被開缺回籍，遠在河南的安陽，而且按照清宮內廷的製度，任何從宮外送入禦用的食物必須先經人試毒。因此即使袁世凱有動機，也不大可能有機會對光緒帝下毒手。袁世凱更不可能再有機會篡改清實錄和脈檔，製造光緒帝病死的假象。
還有人認為，當時除了慈禧太後外，並無其他人具備指使對皇帝下毒的能力。
李蓮英說
曾擔任慈禧禦前女官的裕德齡在其英文版自述《瀛台泣血記》中提出，對光緒帝下手的人應該是李蓮英。但這種說法頗不合李蓮英素常“侍上以敬，待下以寬”的行跡。也無任何其他史料支持。
光緒帝的墳墓（清西陵的崇陵）曾經被打開，後來清理封閉，留下若幹頭發、遺骨和衣服等由該處妥善保存。