實驗三十九：糖類性質實驗
【實驗目的】
（1）加深對單糖、二糖、多糖化學性質的認識。
（2）進一步體會糖類化合物的分子結構與其化學性質的關係。
【實驗原理】
糖是多羥基醛、多羥基酮或它們的縮合物。單糖及分子中含有半縮醛（酮）羥基的二糖都具有還原性，能將班氏試劑還原成磚紅色的Cu2O沉澱。蔗糖等不含有半縮醛（酮）羥基的糖則無還原性。但蔗糖經水解生成了葡萄糖和果糖，因而水解液具有還原性。
多糖是由許多單糖縮合而成的高分子化合物，無還原性。但多糖在酸存在下加熱水解，可生成單糖，隨之具有還原性。澱粉為均一多糖，經水解先生成糊精，再水解成麥芽糖，最終水解產物是葡萄糖，因此水解液也具有還原性，能與班氏試劑發生反應。澱粉遇碘顯藍色，此反應很靈敏，常用於檢驗澱粉或碘。
糖在濃酸存在下，可與酚類化合物產生顏色反應。糖在濃硫酸的作用下與α——萘酚反應顯紫色，常用於糖類化合物的檢出。己酮糖與間——苯二酚——鹽酸試劑反應很快出現鮮紅色，而己醛糖顯色緩慢，2min後可出現微弱的紅色，因此常用於區別酮糖和醛糖。
【試劑與器材】
1.試劑
（1）班氏試劑的配製：稱取檸檬酸鈉20g，無水碳酸鈉11.5g，溶於100mL熱水中，在不斷攪拌下把含2g硫酸銅晶體的20mL水溶液慢慢加入。溶液應澄清，否則需過濾。
（2）2％葡萄糖。
（3）2％果糖。
（4）2％麥芽糖。
（5）2％蔗糖（所用蔗糖必須純淨）。
（6）2％澱粉溶液：將2g可溶性澱粉用10mL蒸餾水調成糊狀，加入90mL沸水中煮沸後冷卻。
（7）3mol／LH2SO4溶液。
（8）10％Na2CO3溶液。
（9）0.1％碘液：在1g碘和5g碘化鉀中，加入盡可能少的蒸餾水使其溶解，然後用蒸餾水稀釋到1000mL。
（10）濃鹽酸。
（11）α——萘酚試劑的配製：將10gα——萘酚溶於95％乙醇中，再用同樣的乙醇稀釋至100mL，貯於棕色瓶中，一般用前才配製。
（12）濃硫酸。
（13）間——苯二酚——鹽酸試劑的配製：將0.05g間——苯二酚溶於50mL濃鹽酸中，再用蒸餾水稀釋至100mL。
2.器材
水浴鍋、試管、移液管等儀器。
【實驗操作】
1.糖的還原性
取5支大試管，編號後各加入1mL班氏試劑，再分別加入2％葡萄糖、2％果糖、2％麥芽糖、2％蔗糖和2％澱粉溶液各10滴。振蕩後，將試管用橡皮筋捆好放入沸水浴中，加熱3～5min，觀察那幾個試管中生成磚紅色沉澱。
2.蔗糖的水解
取2支大試管，各加入2％蔗糖溶液1mL，然後於一支試管中加入3mol／LH2SO42滴，將此支試管置於沸水浴中加熱5～10min，冷卻後，用10％Na2CO3中和，直到沒有氣泡發生為止。將兩支試管各加入班氏試劑1mL，再在沸水浴中加熱3～5min，觀察並比較兩管的結果。
3.澱粉與碘的作用
取1支大試管加10滴2％澱粉溶液和1滴0.1％碘液，觀察呈現的顏色。然後將此試管放入沸水浴中加熱5～10min，觀察有何現象。取出試管，放置冷卻，又有何變化，為什麼？
4.澱粉的水解
取1支大試管，加2％澱粉溶液2mL，再加入濃鹽酸3滴，在沸水浴中加熱10～15min，加熱時每隔1～2min取出1滴反應液，置於白瓷滴板上，加1滴碘液，注意觀察其顏色的變化過程，直到無藍色出現為止。取出試管，冷卻後，用10％Na2CO3中和，直到沒有氣泡發生為止，加入班氏試劑5～10滴，然後在沸水浴中加熱3～5min，觀察結果。
5.糖的顏色反應
（1）α——萘酚反應：取4支小試管，分別加入2％葡萄糖、2％果糖、2％蔗糖和2％澱粉溶液1mL，然後各加入新配製的α——萘酚試劑2滴，混合均勻後，將試管傾斜沿管壁徐徐注入濃硫酸各1mL，切勿搖動。然後豎起試管，靜置10min，觀察兩液界麵之間出現紫色環。如無紫色環生成，可在水浴中溫熱後再進行觀察。
（2）間——苯二酚反應：取4支大試管，分別加入間——苯二酚——鹽酸試劑1mL，然後在三支試管中各加入2％葡萄糖、2％果糖、2％蔗糖溶液5滴，第4支試管留作對照。將4支試管搖勻後，同時放入水浴中加熱2min，觀察各管出現顏色的順序。
【思考題】
（1）可用何種顏色反應鑒別酮糖的存在？
（2）α——萘酚反應的原理是什麼？
實驗四十：血糖的定量測定（福林——吳憲法）
【實驗目的】
（1）掌握Folin-Wu法測定血糖含量的原理和方法。
（2）學會無蛋白血濾液的製備。
【實驗原理】
無蛋白血濾液與堿性硫酸銅試劑混合加熱後，濾液內的葡萄糖將兩價的高銅［Cu（OH）2］還原為一價的低銅（Cu2O）。再加磷鉬酸試劑後，生成藍色的化合物鉬藍。與同樣處理之標準管比色，即可求得血液中葡萄糖的含量。
測定血糖時必須先除去蛋白質，再進行檢測。向全血中加入鎢酸鈉、硫酸，氫氧化鋅，三氯乙酸等均可製得無蛋白濾液。本實驗選用鎢酸法：鎢酸鈉與硫酸作用生成鎢酸，可使血紅蛋白等凝固、沉澱，過濾或離心除去沉澱即得無蛋白濾液。此種濾液還適用於無蛋白氮、肌酸、尿酸等的測定。
【試劑儀與器材】
1.試劑
（1）堿性銅溶液：無水碳酸鈉40.0g，溶於蒸餾水約400mL中；酒石酸7.5g，溶於蒸餾水約300mL中；結晶硫酸銅4.5g，溶於蒸餾水約200mL中。分別加熱使之溶解，冷卻後將酒石酸溶液倒入碳酸鈉溶液中，再將硫酸銅溶液倒入，補加蒸餾水至1000.0mL。
（2）磷鉬酸試劑：將氫氧化鈉40.0g溶於蒸餾水約800mL中，再加鉬酸35.0g及鎢酸鈉10.0g。為除去鉬酸內可能存在的殘氮，煮沸20～50min，冷卻後，置1000mL量瓶內，並以少量蒸餾水多次衝洗原容器壁，一並傾入量瓶，加入80％濃磷酸250.0mL後，以蒸餾水稀釋至1000.0mL混勻。
（3）0.25％苯甲酸（又名安息香酸）溶液：苯甲酸2.5g，溶於煮沸的蒸餾水1000.0mL，使成飽和溶液。
（4）葡萄糖標準貯存液（10mg／mL）：精確稱取純葡萄糖1.0g，置於100mL容量瓶內，加入0.25％苯甲酸至刻度處。
（5）葡萄糖標準應用液（0.1mg／mL）：精確吸取葡萄糖標準貯存液1.0mL，置於100mL容量瓶中，用0.25％苯甲酸稀釋至刻度處。
（6）10％鎢酸鈉溶液。
（7）0.333mol／L硫酸溶液。
2.器材
分光光度計、血糖管、奧氏吸管、水浴鍋、漏鬥等。
3.材料
動物血液。
【實驗操作】
1.無蛋白血濾液的製備
用奧氏吸管吸取已加抗凝劑的全血1mL，緩緩放入20mL錐形瓶中，加水7mL，搖勻，血液變成紅色透明時加10％鎢酸鈉1mL，搖勻，再加0.333mol／L硫酸1mL，隨加隨搖，加完放置5～15min，至沉澱由鮮紅變為暗棕色，濾紙過濾。每毫升無蛋白血濾液相當於0.1mL全血。
2.血糖的測定
取血糖管3支，編號，用奧氏吸管吸取無蛋白血濾液1.0mL，放入第一支血糖管中；於第二支血糖管中加1.0mL標準葡萄糖溶液；第三支血糖管中加1.0mL蒸餾水。然後各加2mL堿性硫酸銅溶液，同時置沸水浴內煮8min，取出在流水中迅速冷卻，各加入2mL磷鉬酸鉬酸鹽溶液，以蒸餾水稀釋至刻度，混勻後放置3min，倒入比色杯，用分光光度計於620nm波長比色（先以空白管調節零點，然後測標準管和樣品管的吸光度）。
3.計算
按下式計算100mL全血中所含的血糖質量（mg）。
葡萄糖（mg／100mL）＝測定管吸光度標準管吸光度×0.1×1000.1=測定管吸光度標準管吸光度×100
【注意事項】
（1）欲得準確結果，所取血液的量必須準確。如果由奧氏吸管中放出血液的速度太快，會有大量血液粘在吸管內壁，容量不準，所以一般放出1mL血液所用的時間不應少於1min。