一、實驗目的
（1）學習掌握各種培養基的配製原理與方法。
（2）掌握高壓蒸汽滅菌的操作方法。
二、實驗原理
培養基是人工配製的適合於微生物生長繁殖或積累代謝產物的營養基質。其中含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子及水等，並需調整在一定的酸堿度範圍之內。由於微生物種類繁多，營養類型各異，加上實驗和研究目的的不同，所以培養基的種類也很多。不同微生物對pH要求不同，配製培養基時，要根據不同微生物對pH的要求，將培養基的pH調至合適的範圍。本實驗通過配製適用於細菌生長和分離的牛肉膏蛋白腖培養基，適用於放線菌生長和分離的高氏Ⅰ號培養基，用於黴菌生長和分離的麥芽汁天然培養基，使學生學習和掌握配製常用培養基的基本原理和方法。滅菌是指殺死一定環境中所有微生物。微生物實驗室常用的滅菌方法包括直接灼燒、恒溫幹燥箱滅菌、高壓蒸汽滅菌、間歇滅菌、煮沸滅菌等方法。這些方法的基本原理都是通過加熱使微生物體內的蛋白質凝固變性，從而達到殺菌的目的。本實驗要求學生學習和掌握培養基高壓蒸汽滅菌的原理和操作方法。
三、實驗材料及儀器
（一）溶液和試劑牛肉膏、蛋白腖、葡萄糖、氯化鈉、瓊脂、1mol/L氫氧化鈉、1mol/L的鹽酸、可溶性澱粉、麥芽、硝酸鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、硫酸亞鐵、磷酸二氫鉀、碘液。（二）材料及器具燒杯、錐形瓶、培養皿、試管、移液管、漏鬥、玻璃棒、量筒、天平、藥匙、稱量紙、pH試紙、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、恒溫水浴鍋、電熱幹燥箱、高壓蒸汽滅菌鍋、電爐、石棉網、試管架等。
四、實驗步驟
（一）牛肉膏蛋白腖培養基的製備培養基配方：牛肉膏30g蛋白腖100gNaCl50g水1000mLpH74～76
（1）稱量：按上述培養基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白腖、NaCl放入燒杯中。牛肉膏用玻棒挑取，放在小燒杯中稱量，用熱水溶化後倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量後直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然後立即取出紙片。蛋白腖很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把藥匙用於一種藥品，或稱取一種藥品後，洗淨、擦幹，再稱取另一藥品。
（2）熔化：上述燒杯中先加入少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解。待藥品完全溶解後，補充水分到所需的總體積。如果配製固體培養基，將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂（瓊脂用量15%到2%）溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最後補足所失的水分。
（3）調pH：先用pH試紙測量上述定容後的培養基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，並隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達74～76。反之，則用1mol/LHCl進行調節。注意pH值不要調過頭，以避免回調，否則，將會影響培養基內各離子的濃度。
（4）分裝：根據實驗要求，可將配製的培養基分裝入試管或三角燒瓶內。①液體分裝：分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。分裝三角瓶的量一般不超過三角瓶容積的1/2。②固體分裝：裝液量不超過試管高度的1/5，滅菌後擺斜麵。分裝三角瓶的量同液體分裝一樣。③半固體分裝：分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌後垂直放置凝固。
（5）加塞：培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口塞上試管塞，以阻止外界微生物進入培養基內而造成汙染，並保持良好的通氣性能。