實驗材料
（一）材料：攜帶質粒的大腸杆菌菌株。攜帶四環素抗性和氨苄青黴素抗性基因。
（二）器材：台式高速離心機及配套塑料離心管，微量移液器及其配套吸嘴，旋渦振蕩器，高速離心機、恒溫空氣振蕩器，常規生化玻璃器皿，電泳儀及電泳槽。
實驗內容
（一）質粒DNA的小量製備
1.將2ml含有氨苄青黴素的LB液體培養基加入到無菌15ml試管，接入單一菌落，於37攝氏度條件下振蕩培養過液。
2.取1.5ml培養物加入到1.5ml管中，室溫下10分鍾，去除上清液。
3.用乙醇洗滌雙鏈人沉澱，離心5分鍾，棄上清。在空氣中將DNA沉澱幹燥10分鍾。
4.加入50mlTE溶液重新溶解DNA沉澱。
5.用瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒，或利用紫外分光光度計檢測所抽提的質粒的濃度。剩餘溶液於41保存。
（二）質粒A的大量製備
1.取小量製備保存下來的30ml含目的質粒的細菌溶液加入250ml含氨苄青黴素的LB液體培養基中，37攝氏度劇烈振蕩培養3小時。
2.加入氯黴素溶液溶於乙醇，劇烈振蕩（300轉/分）培養12~16小時。
3.再入10ml溶液1及10ml溶菌酶液。
4.加20ml新配製的溶液，顛倒離心管數次充分混勻，於室溫下放置5~10分鍾。
5.加入15ml冰預冷的溶液，充分混勻，此時應不出現明顯的兩個液相，置冰上10分鍾，形成白色絮狀沉澱。
6.用4層無菌紗布將上清過濾到另一離心管中，加0.6倍體積異丙醇，充分混勻，室溫放置10分鍾。
7.加入5mlTE溶解質粒DNA，零下20攝氏度保存。
（三）質粒DNA的純化
1.在大量製備所得的質粒人溶液中，加入DNA溶液中，37攝氏度保溫2—3小時。
2.加入SDS至1%，68攝氏度水浴30分鍾。
3.加入溶液，冰浴1小時後，4攝氏度，離心20分鍾。
4.將上清液轉至另一離心管中，加適量PEG溶液充分混勻，4攝氏度過液。
5.4攝氏度離心25分鍾，棄上清。
6.沉澱溶於10mlTE溶液中，依次用酚：氯仿和氯仿抽提一次。
7.將水相轉至另一離心管中，加入2倍體積無水乙醇沉澱DNA。
8.4攝氏度離心5分鍾，棄上清。
9.加5ml70%乙醇洗滌沉澱，再離心5分鍾。
10.棄乙醇、室溫下瓶口向下使乙醇揮發。
11.加入1mlTE溶液溶解沉澱。
12.取5~100進行瓊脂糖凝膠電泳檢測或紫外分光光度計檢測質粒DNA濃度。
注意事項
1.苯酚腐蝕性很強，可引起嚴重灼傷，操作時應帶手套，如若濺到皮膚上，應立即用大量水清洗：並用肥皂水洗滌，切忌用乙醇。
2.實驗所用的離心管、微量移液器吸嘴以及試劑均需消毒至無菌狀態。
3.偶然情況下，小量製備物中無質粒DNA，一般是DNA沉澱隨同乙醇一起被棄去，操作時應十分小心。
4.如進一步對質粒DNA進行限製酶切時，發現質粒DNA不能被限製酶所消化，可能是質粒核酸沉澱中含有較多雜質，如蛋白質等。可用酚氯仿（1：1）溶液進一步抽提。