1)成熟卵:透明帶下的卵周隙內有一個小的細胞,叫做第一極體,它是由卵子釋放的。第一極體的釋放是卵子成熟的指標。
2)未成熟卵:有兩種不同時期的未成熟卵。一種是在透明帶下的卵周隙內沒有第一極體,但卵子內有一個明顯的核,叫做生發泡,這種卵叫做生發泡期卵,這是最早期的未成熟卵。另一種是卵子的卵周隙內沒有第一極體,卵子內也沒有一個明顯的核,這是處於生發泡期卵和成熟卵之間的未成熟卵。未成熟卵是不能用於受精的,必須等到它們完全成熟後才能用來受精。
3)過成熟卵:卵子成熟後必須受精。從卵子成熟到受精之間的時間一般是5~6個小時。如果在這個時間段內未能受精,卵子將會開始老化,最後死亡。由於卵子取出的時候卵泡大小不一,卵子的成熟階段也就不可能在同一個時期。如果用時間過長,或卵子在受精前的體外時間過長都會使卵子過成熟。雖然過成熟卵能夠被受精,但是由它產生的胚胎質量將會很差,胚胎移植後很難懷孕。
4)異常卵:有些卵從體積上看要比正常卵大許多,卵周隙內有兩個第一極體,這樣的卵的染色體是異常的,通常有兩套染色體,因此是不能用來受精的。有的卵可能在成熟的某一階段細胞內有異常的形態,如空泡、質地變黑等,這些都是卵子質量不好的標誌。
4、取精(胚胎的第0天)
用於體外受精的精子可以是新鮮采集的精液,也可以是冷凍保存的精液或者是從睾丸、附睾內抽取的精子。
如果是新鮮精液,采集應與取卵同時進行。實驗室工作人員或護士會告訴病人注意事項和采集方法,並提供無菌的精液采集小杯。精液采集後,需馬上送到實驗室,實驗室工作人員接照實驗室方法處理精液,包括將液化的精液在加入洗滌液後離心,將精漿除去,再用上遊法或密度梯度離心法將活動的精子分離出來。
如果是睾丸或附睾內抽取精子,丈夫需要做一個小手術來取得精子。如果是冷凍精子或供精(大多數是冷凍精子),精子應該在取卵前儲藏在實驗室,不需男性患者當天去門診。
5、授精(胚胎的第0天)
授精本身是一個非常簡單的過程。如果要做常規的體外受精,取卵後4~5小時將處理後的精子在計算確定好數量後與卵子放在同一個培養皿中,共同培養14~18小時左右,然後在顯微鏡下觀察受精情況。精子數量必須確定,精子過多或過少都會影響卵子受精的結果。精子過多將導致多精子受精卵的產生,而精子過少將不能使卵子受精。若精子質量太差,就無法做常規的體外受精,如睾丸、附睾內抽取的精子,則必須以顯微注射的方法授精(詳見顯微授精)。
6、受精檢查(胚胎的第1天)受精14-18小時後,必須檢查卵子的受精情況。將那些受精的卵子(這時候應該叫受精卵)挑選出來在胚胎培養液中繼續培養。用來受精的卵子並不一定會全部成功受精,有的可能沒有受精,而有的可能是異常受精。受精卵的判斷有以下幾個標準:
1)未受精卵:精子沒有進入卵子,卵子的狀態與受精前完全一樣。這些卵子可能會出現一些過成熟的表現,有時很難從卵子的形態上來判斷。如果重新授精,這些卵子也有受精的可能,但來源於這種卵的受精卵,胚胎的發育不是很好,如果移植這樣的胚胎懷孕的機會是非常小的。
2)正常受精卵:一個精子穿入卵子,並將卵子激活,卵子釋放出第二極體。因而卵周隙內可以看到兩個極體,卵子的分裂到此為止。卵子內這時形成兩個核,稱為原核,其中一個來源於卵子(雌原核),而另一個來源於精子(雄原核)。這是正常受精卵,不過這時候應當稱之為胚胎。受精卵內的遺傳物有一半來自卵子,另一半來自精子。準確地講,一個真正的生命就此開始了。
3)多精受精卵:如果有兩個或者兩個以上的精子進入卵子,卵子也能夠被激活,並釋放出第二極體,並形成一個來自於卵子的原核,但是每一個進入卵子的精子也能形成一個來自於精子的原核。因此,這時候的卵子內部有三個或三個以上的核。這種受精卵叫做多精受精卵。胚胎的染色體將來就不是23對,而是多於23對。大多數情況下多精受精卵不能正常發育和著床。多精受精卵的胚胎必須廢棄,不能用來移植。
多精受精卵出現有兩個方麵的原因:一個是卵子方麵。在正常情況下,卵子成熟後.它會產生一種多精受精阻止機製,它包括卵子的膜下出現的一些含有酶的顆粒(叫做皮質顆粒)和卵子周圍的透明帶。當第一個精子進入卵子的時候,這些皮質顆粒的膜與卵細胞膜融合.將酶釋放到卵周隙。細胞膜的變化快速地阻止了正在進入的其他精子。與此同時,皮質顆粒釋放的酶將對透明帶的蛋白質起作用,改變透明帶的性質,使其他精子不能繼續進入透明帶,這樣一來就達到了阻止多精受精的目的。如果卵子的成熟有問題或透明帶異常,都會導致多精受精。這種情況在臨床上較為少見,如果有,可以用顯微受精的方法來避免。另一個是精子方麵。正常受精時,一個卵子的周圍不是隻有一個精子,而是有數以千計的精子,這樣才能保證有一個精子進入。如果卵子周圍精子過少,卵子就不能被受精,而精子過多,將會導致多精受精。這時候幾個精子同時進入卵子,卵子無法在短時間內阻止它們。多精受精的程度和多精受精的比例與受精時的精子濃度成正比。因此,常規的體外受精時的精子濃度必須計算準確,以減少多精受精。