一、實訓目標
熟練掌握層析柱裝柱技術。
二、實訓原理
層析是利用不同物質理化性質的差異而建立起來的技術。層析係統由兩個相組成：一是固定相，它是固體物質或者是固定於固體物質上的成分；另一是流動相，如水和各種溶媒。當待分離的混合物隨流動相（溶媒）通過固定相時，由於各組分的理化性質存在差異，與兩相發生相互作用（吸附、溶解、結合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對比）不同，而且隨流動相向前移動，各組分不斷地在兩相中進行再分配。與固定相相互作用越弱的組分，隨流動相移動時受到的阻滯作用越小，向前移動的速度越快。反之，與固定相相互作用越強的組分，向前移動速度越慢。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組分，從而達到將各組分分離的目的。
三、主要儀器及試劑
儀器：15～20cm長的酸式滴定管一支、滴液漏鬥、裝有橡皮塞的玻璃棒。
試劑：矽膠G（柱層析用）、95%乙醇等。
四、實訓內容與步驟
1.裝柱方法
可用幹法裝柱和濕法裝柱兩種裝柱方法。
（1）幹法裝柱將幹燥吸附劑，經漏鬥均勻地成一細流慢慢裝入柱中，時時輕輕敲打玻璃管，使柱填得均勻，有適當的緊密度，然後加入溶劑，使吸附劑全部潤濕。此法簡便，缺點是易產生氣泡。
（2）濕法裝柱將洗脫劑與一定量的吸附劑調成糊狀，慢慢倒入柱中，將柱下的活塞打開，使溶劑慢慢流出，吸附劑漸漸沉於柱底。
吸附劑用量，一般為被分離物質的量的30～50倍。如果被分離組分性質相接近，吸附劑用量要更大些，甚至達到100倍。柱高與柱直徑比約為7.5∶1。
2.實訓操作
在15～20cm長的酸式滴定管中，裝入少量脫脂棉，輕輕壓緊，以防吸附劑阻塞開關。將幹燥矽膠G經漏鬥成一細流流入柱中，不要中斷，用裝有橡皮塞的玻璃棒輕輕敲打柱子下端，使矽膠G填充均勻，緊密適度。然後經滴液漏鬥沿柱壁注入95%乙醇，使矽膠G全部潤濕，同時打開下端活塞，控製流速為1滴/s，並用燒杯收集乙醇。
五、注意事項
（1）層析柱大小可根據實際需要選擇，一般來說，細長的柱分離效果較好。若樣品量多，最好選用內徑較粗的柱，但此時分離效果稍差。柱管內徑太小時，會發生管壁效應，即柱管中心部分的組分移動慢，而管壁周圍的移動快。柱越長，分離效果越好，但柱過長，柱分離時間長，樣品稀釋度大，分離效果反而不好。
（2）裝好的層析柱要均勻，不能有斷層、紋路或氣泡，將柱管對著光照方向觀察，若層析柱床不均勻，必須重新裝柱。
（3）各接頭不能漏氣，連接用的小乳膠管不要有破損，否則造成漏氣、漏液。操作過程中，層析柱內液麵不斷下降，則表示整個係統有漏氣之處，應仔細檢查並加以糾正。
六、考核標準
優秀:能準確、熟練快速地完成層析柱裝柱，裝柱操作步驟正確，無斷層、紋路或氣泡現象。口試中能準確回答問題，思路清晰；筆試和回答問題準確率高。總體答對率在90%以上。
合格:操作步驟不出現差錯，操作正確率在60%以上。口試中能較準確回答問題，思路較清晰；筆試和回答問題準確率尚可。總體答對率在60%以上。
不合格:達不到合格的要求。