蜂膠是蜜蜂從植物芽孢或樹幹上采集的樹脂(樹膠),混入其上齶腺、蠟腺的分泌物加工而成的一種具有芳香氣味的膠狀固體物。蜂膠含有多種活性物質,比如黃酮、萜烯、酯類等。我國藥典記載蜂膠的功能主要有:內服補虛弱、化濁脂、止消渴;外用解毒消腫。
(一)原理
蜂膠中含有阿魏酸、蘆丁、楊梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、鬆鼠素、柯茵、高良薑素、咖啡酸苯乙酯等活性物質。在紫外270nm處均有吸收,用液相色譜在反相C18柱上,多種活性物質因極性的不同被分離出來。用峰麵積外標法定量,計算出活性物質的含量。
(二)儀器與試劑
1.儀器
(1)超高效液相色譜(配有紫外檢測器);
(2)超聲波。
2.試劑
本實驗用水均為去離子水或同等蒸餾水;所用試劑若不加說明,均為分析純試劑。
(1)甲醇(色譜純);
(2)阿魏酸、桑色素、蘆丁、楊梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、鬆鼠素、柯茵、高良薑素、金合歡素、咖啡酸苯乙酯標準品。
(三)測定方法
1.樣品的製備
稱取蜂膠樣品0.1g(精確到0.001g,不同蜂膠製劑應該根據其蜂膠含量來確定稱取樣品的質量),放入50mL的容量瓶中,加入40mL甲醇,在超聲波浴槽超聲至樣品完全溶解,用甲醇定容,用0.45μm的濾膜過濾,濾液用作上機分析。
2.色譜條件
(1)色譜柱:WatersBEHShieldRP18柱(100mm×2.1mm,1.7μm)或相當者;
(2)流動相:A相為甲醇,B相為0.4%甲酸水溶液;
(3)流速:0.5mL/min;
(4)梯度洗脫;
(5)柱溫:40℃;
(6)檢測波長:270nm;
(7)進樣體積:5μL。
3.測定
準確吸取標準溶液和樣品提取液各5μL分別注入色譜係統,以標準物保留時間定性,通過峰麵積計算各種黃酮的含量。
(四)結果計算
參考文獻
李熠,趙靜,薛曉鋒,周金慧.超高效液相色譜法同時測定蜂膠中的12種活性成分.色譜,2007,25(6):857~860.