連續發酵是指以一定的速度向培養係統內添加新鮮的培養基,同時以相同的速度流出培養液,從而使培養係統內培養液的量維持恒定,使微生物細胞能在近似恒定狀態下生長的微生物發酵培養方式。連續培養又稱連續發酵,它與封閉係統中的分批培養方式相反,是在開放的係統中進行的培養方式。連續發酵大大提高了發酵的生產效率和設備利用率,可達到穩定、高速培養微生物細胞或產生大量代謝產物的目的。連續發酵過程通常又分為單級和多級連續發酵。本節以單級連續發酵為例介紹連續發酵動力學的計量方法。
一、微生物生成動力學
為了描述恒定狀態下恒化器的特性,必須求出細胞和限製性營養物濃度與培養基流速之間關係的方程。利用物料平衡,很容易建立有關的方程。對微生物細胞的衡算,可按下式進行:
流入的細胞-流出的細胞+生長的細胞-死去的細胞=積累的細胞
如果流出的細胞不回流,則流入細胞項為0。由於連續培養過程可控製細胞不進入死亡期,死亡細胞可忽略不計,故可用式(6-19)來描述。
dXdt=μX-DX(6-19)
當連續發酵達到穩態時,細胞濃度是個常數,即此時dXdt=0,根據式(6-19),
μX=DX,μ=D
這說明,當連續發酵達到穩態時,比生長速率等於稀釋率,即比生長速率受到稀釋率的控製。
二、限製性營養物消耗動力學
與微生物生成過程中的物料衡算類似,經過一段時間的培養後,生長限製性底物殘留濃度的變化可描述為:
底物殘留濃度的變化=流入的底物量-排出的底物量-細胞消耗的底物量
用公式可描述如下:
dSdt=DSin-DSout-1YX/S×dXdt(6-20)
式中S——底物濃度
Sin——流入底物的量
Sout——排出底物的量
YX/S——底物轉化為細胞的得率
因為dXdt=μX,所以式(6-20)可變為:
dSdt=DSin-DSout-μXYX/S(6-21)
當連續發酵達到穩態時,即恒化培養,dSdt=0,那麼(6-21)可變為:
DSin-DSout=μXYX/S(6-22)
又因為此時μ=D,所以,式(6-22)可變為:
DSin-DSout=DXYX/S,
簡化為X=YX/S(Sin-Sout)(6-23)
可以看出,稀釋率D可以控製比生長速率μ。細胞的生長可導致底物的消耗,直至底物的濃度足以支持比生長速率與稀釋率相等時為止。如果底物被消耗到低於支持適當的比生長速率的濃度,細胞洗出量大於所能產生的新細胞量時,則底物由於菌體消耗濃度減少而增加,並使比生長速率上升而恢複平衡,這是係統的自身平衡。
連續發酵和分批發酵比較,具有以下優點:①可以維持穩定的操作條件,從而使產率和產品質量也相應保持穩定;②能夠更有效地實現機械化和自動化,降低勞動強度;③減少設備清洗、準備和滅菌等非生產占用時間,提高設備利用率,節省勞動力和工時;④由於滅菌次數減少,使測量儀器探頭的壽命得以延長;⑤容易對過程進行優化,有效地提高發酵產率。
連續發酵的缺點:①對設備、儀器及控製元件的技術要求較高,從而增加投資成本;②由於是開放係統,加上發酵周期長,容易造成雜菌汙染;③在長周期連續發酵中,微生物容易發生變異,生長慢的高產菌株很可能逐漸被生產快的低產變異株取代,從而使產率下降;④黏性絲狀菌菌體容易附著在容器壁上生長及在發酵液中結團,給連續發酵操作帶來困難。第七章發酵工藝控製