人上皮細胞在很多訪免疫病的診斷打常人的價俏,常被用於檢測抗細胞核抗體(抗核技體)等以抗體。以良好製劑的細胞結,肝組織的冰凍片戰質的綜合實驗。
通過分析細胞的災光模式,預先要分出陽性。如似要,撲繼線迸中特件分析,來確定分抗體足針對哪一種特定抗體。前隻介小部分邸細胞檢測到的杭休能朽判步地檢測,叫為可以捋到的純化抗原種炎,所打的相關抗擬杬體係統都被發現。
第一節 HEp-2細胞/靈長類肝複合片用於抗核抗體檢測
過上認為,長炎肝別織冰凍叫足識別抗核的準,然其熒光校式,各種細胞核抗體史科從被分,酬細胞核常7塊狀及小規則形態。因此以別出杭紋分裂特片性結構的杬作,技者處點的診斷也張。
肝組織對陰性結果的區分更可靠。此時,肝細胞核不發熒光,而II如細胞常仍有綠色微弱熒光,所以使用肝組織片確定終點滴度更確切。另外,它還可以識別抗肝特異性抗原的抗體。肝組織也是識別抗中性粒細胞漿抗體,抗肌內膜抗體的良好基質,能對相關診斷領域提供有價值的信息肉芽腫,多種類型的腎小球腎炎、原發性硬化性膽管炎、潰瘍性結腸炎、麩質過敏性腸病。
然而,許多用細胞能測到的抗核抗體並不與肝組織起反應,即使用靈長類的肝組織也無濟於事。相反,還有非常少的一部分抗核抗體,有時即使滴度高也不能用細胞檢測到,卻能用肝組織和其它器官的組織片檢測到。不同器官的細胞核,即使是同一種係,其抗原譜也是明顯不同的。因此,細胞核抗體正確診斷的前提就是對每一份血清進行隻均細胞及肝組織切片兩種基質的聯合測定。
如果每份血清都用細胞和靈長類肝組織基質進行聯合測定,通過對比熒光模式,可以將某些抗核抗體預先區分。雙鏈組蛋白及核點型等抗體的熒光模式,在細胞與肝組織中具有相同的熒光強度,而著絲點及增殖性核抗原抗體的熒光模式,肝組織的熒光強度要比隻均細胞弱得多。隻有進行聯合測定,才有可能做出準確的判定,如是抗著絲點抗體還是抗核點型抗體。
抗體的最終區分需要使用帶有純化抗原的實驗基質。如酶聯免疫吸附測定法,但使用酶聯免疫吸附測定一種檢測方法不能滿足抗核抗體的檢測要求,因為到目前為止並不是所有的相關純化抗原都能得到,因此必須同時進行免疫熒光檢測,以作對照。
在很多疾病特別是風濕性疾病患者血清可以檢測到抗核抗體。其中最常見的如下:
盡管抗核抗體在許多自身免疫病診斷中的意義已經明確,但大多數情況下,抗核抗體在致病機製中的作用仍屬未知。
第二節 抗雙鏈DNA及抗單鏈DNA抗體
實驗基質:測定抗出血鞭毛蟲屬的綠蠅短膜蟲,可聯合使用細胞及靈長類肝組織冰凍切片。
待檢血清的起始稀釋度:綠蠅短膜蟲細胞猴肝複合片。
熒光抗體:異硫氰酸熒光素標記的抗人抗體,必要時加用異硫氰酸熒光素標記的抗體。
綠蠅短膜蟲:拉加八抗體表現為動基體均質的或邊緣亮度增強的熒光,僅細胞核或鞭毛基體的熒光判斷為陰性。細胞:抗體示為細胞核的均質耶炎光。分裂期細胞的濃縮染色體炎光增強,染色體周圍區熒光較弱。細胞沒有尚定好時,也隻有在這種情況下,會出現核周熒光。長類肝組織:抗體拔不為細胞核均質哦熒光,有時也出現粗的或細的塊狀熒光。
有時無論使用細胞還是綠蠅短膜蟲,從用免疫熒光法都不能檢測到抗體,因為其抗原位點在很大程度:被遮蓋了。可使用酶聯免疫吸附測定法檢測。
自身抗原:抗體的反應位點位於外圍區,脫氧核搪磷酸框架上。相反,抗體的作用位點主要是來自嘌呤和嘧啶的堿甚區。血鞭毛蟲屬綠蠅短膜蟲,它有個大的含有的線粒體動甚體,其出除了加,通常不含有其它抗原。與動基體起反應的自身抗體為抗體,抗體免疫熒光實驗的標準基質是血鞭毛蟲屬的綠蠅短膜蟲。
臨床意義:幾乎僅在係統性紅斑狼瘡病人發現抗體,因使用的實驗方法和疾病沽動度的不同,其發生率為60%—90%。由丁其特異性高,抗出抗體為該病的重要診斷標準之一。如果健康人血清出檢測到此抗體,其出85%的人五年內發展為係統性紅斑狼瘡。由抗體滴度與疾病話動度存在相關性,因此抗體滴度的測定為監控治療提供了有效的依據。但不能因為檢測不到抗體而排除係統性紅斑狼瘡的診斷。
使用綠蠅短眼蟲作為的免疫熒光實驗對係統性紅斑狼瘡具有高度特異性。當有相關症狀時,1:10的滴度就有意義,然而,其敏感度不足很高。所以建議對懷疑係統性紅斑狼瘡的患者標本另外進行酶聯免疫吸附測定檢測,其敏感度更高,但對該病的特異性較差。
抗體,除了作係統性紅斑狼瘡,也可存許多其它自身免疫病出,混合性結締組織病20%—50%,多發性肌炎皮肌炎40%—50%,進行性係統硬化症14%,幹燥綜合症13%,類風濕性關節炎89%。通常不必檢測抗體,閃為與使用細胞檢測抗核抗體相比,它無法提供任何進步的診斷依據。
其它:使用細胞或肝冰凍片,隻有高滴度的抗體才在細胞核出產生熒光。這是因為一方麵,95%細胞及肝組織細胞核出抗原濃度僅為綠蠅短膜蟲動基體出的分之。另一方麵,標準抗核抗體實驗程序通常的起始稀釋度為1:100,而使用綠蝴短膜蟲時的起始稀釋度為1:10。因此,檢測抗體時,推薦同時使用綠蠅短膜蟲和肝組織作甚質的免疫熒光實驗,以及更敏感的酶聯免疫吸附測定實驗。
在酶聯免疫吸附測定和放射性核素法實驗中,采用生物提取作為實驗基質,在製備過程出,內部結構位點可能少部分人為暴露,從而會因抗體的存在產生偶然性非特異性反應。
第三節抗組蛋白抗體
同義名:組蛋白反應抗核抗體。
實驗基質:細胞及靈長類肝組織冰凍切片。
待檢血清的起始稀釋度:1:100。
熒光抗體:異硫氰酸熒光素標記的抗人抗體,必要時加用異硫氰酸熒光素標記的抗體。
免疫熒光模式:與抗體相似,抗組蛋白抗體在隻有細胞核也產
生均質型熒光,分裂期細胞的濃縮染色體熒光增強。靈長類肝組織冰凍切片上,也可見到細胞核均質型熒光,但有時為粗塊狀熒光。抗組蛋白抗體不引起綠蠅短膜蟲動甚至產生熒光。
自身抗原:組蛋白為基礎的相關蛋白,作用為穩定雙鏈,也可能在基因調節出起作用。組蛋白可分為五種,這五種組蛋白類型都有各自對應的自身抗體。組蛋白與形成了緊密結合的核小體。核小體中心由四聚體組成,聚體位其兩側,組蛋白部分被雙鏈圍繞近兩圈(共146個堿基對)。核小體似串珠狀結合在一起,中間由組蛋白聯接,進一步彎曲即染色質纖維。
臨床意義:抗一種或多種組蛋白片斷的抗體,或者抗複合體的抗體,主要見廠藥物誘導的普魯卡因胺、其它紅斑狼瘡另外,抗組蛋白抗體還見的非藥物誘導的紅斑狼瘡以及類風濕關節炎患者。
其它:建議用歐蒙抗組蛋白酶聯免疫吸附測定試劑盒對血清作進步特異性測定。
第四節抗核糖核蛋白抗體及SM抗體
同義名:通常指的核糖核蛋白體,即為抗體;抗史密斯抗體。