一、摘要
五齡蠶經高、低溫衝擊一定時間後，蠶體中腸組織發生病變，中腸細胞發現壞死，腸壁折皺減少，單位細胞密度下降，並且，中腸的各種細胞類型比例發生變化，圓筒型細胞明顯減少。衝擊後的蠶經室溫條件8小時後，圓筒型細胞數呈上升趨勢。BmDNV感染衝擊後的蠶，恰是中腸為修複破損細胞而大量增殖新細胞的時期，因這些新生細胞對病毒最敏感，所以最終表現為大量發病。中腸組織的糖元含量與其所處的環境有關，糖元參與了蠶的中腸組織的修複和細胞再生等過程。
二、 緒言
沢等（1964）報道，家蠶質型多角體病毒（CPV）對經5℃、24小時衝擊後的蠶特別敏感〔1〕。沢1966年證明，起蠶經5℃的低溫衝擊後，中腸消化液的pH值下降，對家蠶質型多角體病毒（CPV）的滅活能力也顯著降低〔2〕。曹詒孫、錢元駿1964年的研究表明，在滅菌條件下，高低溫衝擊蠶對家蠶核型多角體病毒（NPV）極敏感，並因蠶體抗病力的下降而大量發病〔3〕。鬆原、吳友良等1984年用人工飼料飼養的無菌蠶，經5℃、24小時低溫衝擊後開始添食家蠶質型多角體病毒（CPV），結果表明，蟻蠶對病毒的敏感性變化不大，自二齡起，對病毒的敏感性隨齡期而顯著增高，五齡期尤為突出〔4〕。在家蠶DNV方麵，有關報道很少，為了弄清楚高溫和低溫衝擊蠶對DNV敏感的原因和機製，我們對五齡起蠶分別進行一係列溫度處理，調查其對DNV的敏感性的變化，並對其中腸進行組織學和組織化學等方麵的研究。現將結果報告如下。
三、 材料和方法
1. 供試蠶品種：
豐１×54A。
2. 不同溫度處理：
將五齡起蠶群體分成5個實驗區，分別進行以下處理。
（1） 不衝擊對照： 25℃室溫條件。
（2） 高溫衝擊： 在40℃補濕條件下4小時。
（3） 低溫衝擊： 在4℃冰箱中20小時。
（4） 高溫衝擊後恢複： 把經高溫衝擊後的蠶放置在室溫25℃條件下8小時。
（5） 低溫衝擊後恢複： 把經低溫衝擊後的蠶放置在室溫25℃條件下8小時。
以上各區，處理後即開始添毒試驗，並設不添毒對照，各區在添毒前取部分蠶解剖中腸，並固定、石蠟包埋。
3. DNV的添毒濃度：
取2.0％中腸腸幹病毒母液，作為100，然後用雙蒸水按10倍稀釋法稀釋成10－1、 10－2、 ……10－8等8個濃度級，其中的10－1、 10－4、 10－83個濃度為經口添毒液，將毒液塗布於麵積為3ｃｍ２的方塊桑葉上，給蠶添毒4小時後，改為正常葉普通育，每小區重複三次，每區100條蠶。
4. 發病鑒別的時間：
以不添毒對照區發育到熟蠶時為發病調查時間，添毒區的蠶與對照區發育同步者為正常，發育遲緩者為發病蠶。
5. 組織切片：
用常規組織切片法，用Delafield氏蘇木精--伊紅染色。
6. 中腸組織化學反應：
Feulgen反應和PAS反應。
7. 顯微圖像分析：
用MV3型圖像分析儀。在Feulgen反應中，以圖像中的細胞核為檢測對象。在PAS反應中，以糖元顆粒為檢測對象。每一處理取5點測定，得出相對灰度，平均後計算相對指數。
四、 結果
1. 經不同溫度處理的五齡蠶添毒DNV後的感染發病率。
2. 不同溫度處理後蠶的中腸組織學變化。
3. 不同溫度處理的中腸細胞類型的變化：
4. 不同處理的組織化學變化
（1） Feulgen反應
中腸組織切片受1N HCl 60℃水解8分鍾後，DNA的脫氧戊糖的醛基呈自由狀態，同雪夫試劑發生反應，在核染色質中產生紫色反應，用圖像分析儀來測定核中DNA的相對含量。同時，所測得的灰度還可以表明其細胞密度的大小。
（2） PAS反應
在本實驗中，對PAS反應呈陽性反應的物質主要是多糖、黏多糖和糖蛋白，下麵統稱糖元。
五、 分析和討論
1. 在較高的添毒濃度（10－1）條件下，對照和衝擊處理的各區均有發病，但正常不衝擊區的發病率最低，這說明正常蠶具有較強的抗DNV能力。高溫衝擊蠶的抗病力下降，發病率成倍增加，經8小時恢複後抗病力明顯上升，發病程度接近於正常蠶。在添毒濃度為10－4時，對照區和高溫處理區對此濃度已不很敏感，但低溫區仍有較高的發病率，恢複區的抗病力稍有提高。