一、摘要
製備了家蠶微粒子（Nosemabombycis）孢子的特異性抗血清，用間接免疫酶標染色法可以對家蠶微粒子孢子進行鑒別。8０℃以下溫度處理1小時，孢子的抗原性不受影響，1００℃處理1小時抗原性消失。
二、緒言
家蠶的微粒子病是蠶的主要病害之一，尤其對蠶種生產危害嚴重。對該病的防治，除了徹底消毒外，曆來是采用母蛾檢查的方法，避免胚種傳染。近幾年來，蠶種生產過程中，微粒子病時有發生，且在母蛾檢查時見有不同形態和大小的微粒子孢子類似物。據報道，不同形態和大小的微孢子蟲對蠶的致病性和傳染方式有所不同，有的無經卵傳染性〔1〕。為了準確及時地淘汰帶毒蠶種，不使病原擴散，首先必須能對微粒子孢子進行鑒別診斷，我們利用微粒子孢子製備了抗血清，建立了微粒子孢子的間接酶標抗體鑒別法，現將結果報道如下。
三、材料與方法
1. 微粒子孢子
家蠶微粒子孢子（Nosemabombycis）由蘇州蠶桑專科學校蠶病教研室提供；蜜蜂微粒子孢子由中國農科院養蜂所提供；柞蠶微粒子孢子由遼寧省蛋業科學研究所提供。
2. 酶標羊抗兔IgG（衛生部北京生物製品研究所）
使用時每支加０．5ml無離子水溶解，再用pH值7．2、０．０1mol/LPBS稀釋至1∶8。
3. 抗血清製備
家蠶微粒子孢子飴漿，經生理鹽水洗滌數次，37℃條件下用胰蛋白酶處理3０分鍾，再經生理鹽水洗滌，得純的微粒子孢子懸液，以此懸液作為抗原，靜脈注射免疫雄性家兔，共注射4次，總劑量為2825０萬粒。
4. 玻片凝集反應
取適當稀釋的抗家蠶微粒子孢子血清1滴，滴於凹玻片或載片上，再加適當稀釋的微粒子孢子懸液1滴，使兩液混合均勻，置37℃保濕靜置。隨時觀察有無凝集塊，產生凝集塊者為陽性，無凝集塊者為陰性，分別以正常血清和生理鹽水代替抗血清作對照。
5. 間接酶標抗體法鑒別〔2〕
（1） 取微粒子孢子懸液塗片，風幹後用1００％丙酮固定8~1０分鍾；
（2） 取出玻片，待丙酮揮發幹後，滴加一滴抗家蠶微粒子孢子血清覆蓋塗片，置保濕盒內37℃條件下3０~6０分鍾；
（3） 取出玻片，先以少量pH值7．2、０．０1mol/L PBS衝去多餘的抗血清，再浸入同樣PBS中漂洗3０分鍾，換液2~3次；
（4） 用濾紙吸去玻片上過多的水分，滴加酶標羊抗兔IgG稀釋液1滴覆蓋塗片，放濕盒內37℃條件下3０~6０分鍾；
（5） 重複（3）步驟漂洗；
（6） 用濾紙吸去玻片上過多的水分，以底物DAB（二氨基聯苯胺鹽酸鹽）顯色8-1０分鍾；