七、骨骼肌組織活檢的酶組化法
骨骼肌在收縮活動中，可出現兩種類型，即Ⅰ型（慢顫搐型）和Ⅱ型（快顫搐型）。根據某些組化反應活性，尚可將Ⅱ型分成A、B、C三個亞型。所謂顫搐，是指肌收縮的痙攣現象，即常稱的“抽筋”。體育運動員在運動中出現顫搐是很不利的。因此，用酶組化法對骨骼肌組織活檢，作為優選運動員的預測，有一定實際意義。
常用於肌組織活檢的酶組化法有：氧化酶，如琥珀酸脫氫酶或NADH黃遞酶對Ⅰ型纖維染色強，但對Ⅱ型纖維則弱。
腺苷三磷酸酶（ATPase）於pH9.4對Ⅰ型纖維染色弱，對Ⅱ型纖維則強。腺苷三磷酸酶經預培育於pH4.6及4.2可使Ⅱ型纖維區分為A、B及C三個亞型。
磷酸化酶（phosphorylase）對Ⅰ型纖維染色弱而對Ⅱ型纖維強。此法主要係用於McArdle症，即磷酸化酶缺乏性肌病的診斷，在該症僅能顯示少量或無此酶活性。
用酶組化法鑒定骨骼肌的分型，均取少量活檢材料，用恒冷箱作肌的橫斷麵切片，經組化處理後，根據所顯示的各種肌纖維類型的數量、大小和相關比例，最後做出診斷。
以下是較通用的腺苷三磷酸酶法對肌組織活檢的染色。
（一）ATPase（pH9.4）法
染色步驟：
（1）取材與切片：給取材對象局麻，可從股外側肌針刺取材活檢。如取自手術室，應在取材後用沾了濕生理鹽水的紗布包裹送實驗室，以防幹燥，否則冷凍切片易產生偽象。將活檢組織，從纖維橫斷麵切成0.5cm3小塊，注意避免含有脂肪。將組織封固於OCT化合物（lab-tek products，naperville，IL）內，裝在恒冷箱切片機的組織上。
冷凍前，先將異戊烷（isopentane）倒入燒杯，並把燒杯懸吊於溫度可達-160℃的液氮容器內，使異戊烷凍成固態。然後取出異戊烷燒杯，放在實驗室工作台上，在室溫融化。待有些固態異戊烷已融成液態，即把肌組織投入液態異戊烷內，於是被快速冷凍。此後，將組織塊裝入恒冷切片箱，待溫度回升到-23～-30℃，即易切成8～10μm的切片。切片可裝貼於蓋玻片或載玻片於室溫晾幹。
（2）切片培育於pH9.4緩衝液，室溫，15分鍾。
緩衝液的配製：0.1mol巴比妥鈉水溶液2ml，0.18mol氯化鈣水溶液2ml，蒸餾水6ml，用0.1N NaOH調節至pH9.4。
（3）轉入培育液，室溫，45分鍾。
培育液的配製：0.1mol巴比妥鈉液2ml，0.18mol氯化鈣液1ml，蒸餾水7ml，腺苷三磷酸（ATP二鈉鹽）25mg，調至pH9.4。
（4）洗於1%氯化鈣液，換3次液，共10分鍾。
（5）換至2%氯化鈷液3分鍾。
（6）充分洗於0.01mol巴比妥鈉液，換6次液。
（7）流水衝洗30秒鍾。
（8）入1%硫化氨（黃）液20～30秒鍾。
（9）流水充分衝洗。
（10）酒精、二甲苯脫水，透明，封固。
（二）ATPase（pH4.6和pH4.2）法
操作法如上，但操作步驟如下：
應培育於pH4.6緩衝液，配法同pH9.4緩衝液。但用0.1N HCl調至pH4.6（pH4.6法）。或pH4.2緩衝液，配法同pH9.4緩衝液，用0.1N HCl調至pH4.2（pH4.2法）。分別培育於室溫，各5分鍾。再各經pH9.4緩衝液漂洗一次，30秒鍾。然後即按該操作法第3步，依次進行。
結果：酶活性反應為不同色調黑色或無色酶染色強度參見表（ATPase pH9.4，4.6，4.2項）。
注：①若要易於鑒別肌纖維所屬類型，最好用連續切片，在不同的pH下對照操作。能保持各肌纖維斷麵的原位、厚薄及大小，且變化限度極小。②Ⅰ型纖維常即紅肌纖維，Ⅱ型纖維即白肌纖維。
（三）異染性染料－腺苷三磷酸酶法（R.W.Ogilvie和D.L.Feeback，1990）
此法的優點是可同時鑒別骨骼肌Ⅰ型，ⅡA型，ⅡB型及ⅡC型，且不需作連續切片。特別對神經-肌肉疾病患者或實驗動物的肌型診斷有價值。
染色步驟：
（1）取材與切片同前。
（2）以晾幹的恒冷箱冷凍切片入預培育液，室溫2分鍾。
預培育液（pH4.5～4.6）配製：蒸餾水475ml，醋酸鉀2.45g，氯化鈣（二水）1.3g，用冰醋酸調至pH4.5～4.6後加蒸餾水至500ml。
（3）經Tris緩衝液漂洗3次，每次2分鍾。
Tris緩衝液配製：蒸餾水950ml，Trizma堿（Sigma）12.1g，氯化鈣（二水）2.6g，用5N HCl調至pH7.8後加蒸餾水至1000ml。
（4）入培育液，室溫培育25分鍾。
培育液配製：蒸餾水30ml，氯化鉀185mg，ATP二鈉鹽76mg，氯化鈣（二水）0.18mol 5ml，Sigma221（1.5mol 2 amino 2 methyl 1 propanol，Sigma Chem.Co.，st.Louis，MO）緩衝液3.35ml。用5N或1N HCl調至pH9.4，加蒸餾水至50ml。
（5）將切片在1%氯化鈣（二水）水溶液內換洗3次，每換洗一次要漂洗切片4次。
（6）用1%甲苯胺藍水溶液染色10秒鍾或用0.1%染液染色90秒鍾（如用同濃度天青A染色，其結果相似，但不如用甲苯胺藍染色深）。
（7）流動的蒸餾水衝洗切片，最多30秒鍾，或用500ml燒杯盛蒸餾水，洗去多餘染液。
（8）快速脫水（用95%酒精換1次，每次沾漂5次，再經無水酒精換2次）此步驟宜快，以保持色調，但不能用丙酮脫水。
（9）用二甲苯透明，換兩次，每次5分鍾，要充分沾漂。合成樹脂封固。
結果：Ⅰ型纖維呈綠鬆石（turquois）色，即藍綠色，ⅡA型纖維呈淡粉紅色，ⅡB型纖維呈紫色，ⅡC型纖維呈藍色。
注：以上各法的結果，雖然在顯微鏡觀察時可顯示肌纖維類型，但如能用顯微鏡攝影法用全色黑白負片（ISO100/21°），按常規拍攝及顯影加工並放大成黑白照片，則在觀察及區分各類型時，就更易於判斷準確。
八、其他染色
其他染色也可顯示肌纖維，如①膠原纖維染色：Heidenhain“AZAN”三色法，肌纖維染色呈紅色；AZAN改變法，肌纖維呈紅色；Masson染色（改變法之一），肌肉及神經膠質纖維呈紅色；Masson染色（改變法之二），肌纖維呈紅色；Van Gieson染色，肌纖維呈黃色。②彈性纖維染色：Schmorl染色，肌纖維染色呈黃色；Verhoeff碘-蘇木精染色，肌纖維呈黃色。③網狀纖維染色的Gordon&Sweet法，肌肉染色呈黃色。