（四）其他類型
酶聯免疫測定方法還有許多其他類型，這些類型多為經典的酶聯免疫測定方法與其他測定技術組合的應用產物，目前已結合應用的方法包括：免疫印跡技術、親和素和生物素標記技術、放射免疫技術、PCR技術等。每種方法雖然帶有相關方法的優點，但往往也產生一些不足。各種方法在使用時應特別注意其應用範圍和優缺點。
1.免疫酶斑點技術（dot-ELISA）
【原理】
免疫酶斑點技術又稱斑點ELISA，是在進行ELISA測定時，借用了免疫印跡技術的某些基本原理和方法，使操作更為方便、簡單和經濟實用；幾乎各種經典的ELISA檢測都可用本法完成，可以進行定性和半定量檢測。其與經典ELISA檢測的區別主要表現在：多數采用硝酸纖維膜（NG膜）為載體，而不用聚苯乙烯，（或其他塑料）微孔反應板；所用酶底物經分解後在局部產生不溶性產物沉澱。
本法的靈敏度與普通ELISA法相近，可達ng水平，不需要任何特殊設備，操作簡單，便於處理小批量樣本，目前已被廣泛應用。由於硝酸纖維膜包被中所需樣品量很少，多被用於一些微量抗原的檢測（將待測抗原包被）、抗體分泌細胞的篩查（用抗原包被，測定培養細胞上清）和自身抗體的檢測。
總之，此方法具有以下優點：①特異性強，假陽性較少；②由於NG膜對蛋白質的吸附能力優於聚苯乙烯，故其敏感性比常規ELISA高6～8倍；③試劑用量少，比常規ELISA至少節約10倍；④抗原膜保存期長，-20℃可保存半年；⑤檢測結果可長期保存；⑥操作簡便，不需要特殊儀器（酶聯檢測儀）。
【材料及試劑】
（1）稀釋液：用於稀釋酶標抗體用。為含10%小牛血清的0.01mol/L pH7.4的PBS。
（2）封閉液：為2%的牛血清清蛋白溶液（用0.01mol/L pH7.4的PBS配製），也可用5%的脫脂奶粉（用0.01mol/L pH7.4的PBS配製代替）。
（3）洗滌液：為含0.5% Tween20的0.01mol/L pH7.4的PBS。
（4）底物溶液：用辣根過氧化物酶（HRP）標記時，底物最常用的有兩種：4-氯-1奈酚和3，3-二氨基聯苯胺（DAB）。
4-氯-1萘酚底物液的配製：將4-氯-1萘酚50mg溶於16ml冷甲醇中，加0.01mol/L pH7.4的PBS至100ml，再加入30%的H2O2 50μl。用前臨時配製。
【實驗步驟】
（1）取硝酸纖維膜（0.3μm、0.45μm和0.65μm孔徑者均可），用鉛筆做好加樣方格（5mm×5mm）並做好相應標記。
（2）將膜浸入0.01mol/L pH7.4的PBS中15～30分鍾，取出用濾紙吸幹。
（3）將要包被的抗原或抗體用0.01mol/L pH7.4的PBS稀釋出1～50μg/ml濃度。
（4）用微量加樣器加樣0.1～0.2μl於相應格內，室溫自然幹燥。
（5）將膜片放入封閉液中振蕩封閉30分鍾，封閉對於本測定方法至關重要，不可省略。
（6）將膜片放入洗滌液中振蕩洗滌3次，每次3分鍾。
（7）用濾紙吸幹膜，將適當稀釋的檢樣滴加到包被膜上，或直接將包被膜浸入適當稀釋的待檢樣品中，室溫振蕩30～40分鍾。
（8）將膜片放入洗滌液中振蕩洗滌3次，每次3分鍾。
（9）將膜片放入酶標記抗體溶液中，室溫振蕩30分鍾。
（10）將膜片放入洗滌液中振蕩洗滌4次，每次3分鍾，此步驟洗滌非常重要，不可隨意縮短洗滌時間。
（11）將膜片浸入底物液中，在振蕩條件下顯色，一般在15分鍾左右顯色充分。用DAB係統底物時顯色呈棕黃色，用4-氯-1萘酚底物時顯色呈灰藍色。
（12）用流水衝洗數分鍾後，放入蒸餾水中終止反應。
【結果判斷】
可根據有無顯色反應判斷結果為陽性或陰性。對於需要作半定量判斷的實驗，需與同一批實驗中不同濃度的標準品的呈色深度作比較判斷。
2.PCR ELISA
【原理】
此檢測方法是PCR（聚合酶鏈反應）技術與ELISA技術結合所產生的一種檢測方法，主要用於檢測標本中的特定基因。引入ELISA技術後，可代替常規基因擴增後的電泳檢測，方便處理大量樣品，靈敏度較使用溴化乙錠印染瓊脂糖凝膠的方法高100倍。配合適當的標準品，能對樣品的目標模板進行定量測定。目前已有種商品化PCR-ELISA試劑盒銷售。
【材料及試劑】
（1）除常規ELISA設備和試劑外，尚需PCR儀（自動熱循環儀）一台，也可用3個恒溫水浴鍋代替。
（2）PCR反應所需試劑、溶液：包括擴增特定基因所需引物、dNTP地高辛（或生物素）標記的dNTP、TaqDNA聚合酶、10×反應緩衝液（100mmol/L Tris-HCl pH500mmol/L KCl）及高壓滅菌石蠟等。
（3）PCR反應所需0.5ml無菌小管、200μl和10μl滅菌吸頭和100μl、10μl加樣器等。
【實驗步驟】
（1）待檢樣品處理（PCR擴增模板製備）：可應用傳統的標準提取技術，從材料中製備DNA和RNA。然而這些方法步驟較多，大量組織和大量不同試劑容易引起汙染，特別是材料間汙染。許多研究者發展了一些快速而相對簡單的替代方法，製備PCR擴增模板。這些方法對材料進行粗裂解（熱、滲透、凍溶、去汙劑、酶促等），並在PCR固有的高度靈敏性和待測靶序列的相對豐度之間進行權衡。其中對完整的細胞進行煮沸處理為最簡單的方法，然而煮沸過多的細胞（＞50000），會抑製PCR反應。因存在抑製劑和模板量較少的原因，粗提物PCR的靈敏度常常低於純化的核酸，但這種敏感度降低並不顯著影響粗提方法的廣泛應用。
（2）基因擴增：根據被擴增基因的（C+G）%比例和擴增片斷長度等因素，經預實驗確定最佳反應條件。一般PCR反應混合物組成如下。
（3）取各待測樣品PCR反應產物各50μl，包被酶標反應板雙孔，4℃孵育過夜（或37℃孵育4小時）後，用洗滌液洗滌3次，每次3分鍾。
（4）每孔加入酶標抗地高辛抗體（或酶標記親和素）100μl，37℃孵育40分鍾，用洗滌液洗滌3次，每次3分鍾。
（5）每孔加入酶底物液，每孔100μl，37℃蔽光環境下顯色，當顯色滿意後，每孔加入終止液50μl終止反應，於20分鍾內測定實驗結果。
（6）用酶標儀讀取各孔OD值。
【結果判斷】
在此實驗中，多采用定性判斷方法，用測定標本孔的吸收值與一組陰性標本測定孔平均吸引值的比值（P/N）表示，當P/N大於某一數值時（如2.1）判斷為陽性，數值的大小依具體檢測要求而定。
【注意事項】
在整個實驗過程中，特別是在PCR擴增中，應設立陽性對照和陰性對照，減少假陽性和假陰性的發生。
第六節 放射性免疫測定
放射性免疫測定是將放射性核素分析的高靈敏度與抗原抗體反應的特異性相結合，以放射性核素作為示蹤物的標記免疫測定方法。由1959年Yalow和Berson首先創建的。由於此項技術具有靈敏度高［可檢測出納克（ng）至皮克（pg），甚至飛克（fg）的超微量物質］、特異性強（可分辨結構類似的抗原）、重複性好、樣品及試劑用量少、測定方法易規範化和自動化等諸多優點。因此，在醫學及其他生物學科的研究領域和臨床實驗診斷中廣泛應用於各種微量蛋白質、激素、小分子藥物及腫瘤標誌物等的分析與定量測定。