第一節 Bm91基因生物信息學分析
Bm91（orf91）在家蠶核型多角體病毒基因編號中為91號，在NCBI數據庫中該登錄號為：GeneBank，NC_ 047508.1。
Bm91的核苷酸和其編碼的氨基酸的序列特征
Bm91位於BmNPV基因組的87452~87769 nt之間，編碼105個氨基酸。預測分子量為11.8kDa。序列分析發現1個典型的晚期轉錄基序TTAAG位於起始密碼子上遊13 nts處，預示其可能為晚期基因。軟件分析預測到Bm91基因內部存在1個高度保守的疏水跨膜結構域及2個N糖基化位點（17~43 aa，102~105 aa），但並未發現信號肽。
通過Blast比對發現Bm91高度保守。同源物位於所有的Group Ⅰ和 Group Ⅱ NPV，相似度從高到低分別達96%~32%，其中與AcMNPV的ORF108的同源性最高，達到了96%。此外，Bm91屬於1個11 kDa基因家族，目前相關功能未知。
第二節 Bm91在BmN細胞中的轉錄、表達和蛋白定位
一、Bm91的轉錄分析
收集BmNPV感染後不同時間點的BmN細胞，提取總RNA進行RT PCR及5′RACE分析，結果如圖582所示。RT PCR結果顯示從感染病毒後12小時開始，用Bm91引物能擴增得到一個大約330bp特異的DNA片段，該轉錄本持續到感染後96小時仍可檢測到，結果表明Bm91可能是一個晚期基因。同時，ie1作為早期基因的對照，用ie1引物從感染後3小時的細胞樣本中開始也檢測到535bp的特異性片段，一直持續到感染後72小時。而vp39作為晚期基因對照，利用vp39引物從感染後12小時的細胞樣本中開始也檢測到472bp的特異性片段，一直持續到感染後96小時。
提取BmNPV感染後24小時及48小時BmN細胞的總RNA進行5′RACE分析，結果顯示Bm91的轉錄起始位點位於起始密碼子ATG上遊12個核苷酸處。
二、Bm91的表達時相
為了分析Bm91的表達情況，收取了mock及BmNPV感染後6小時、12小時、24小時、72小時和96小時的BmN細胞樣品，用Bm91多克隆抗體進行Western blot分析。結果顯示從病毒感染後24~96小時，都能檢測到1條特異蛋白質帶能與Bm91抗體發生特異性反應。
用mock和BmNPV感染後的不同時間（6小時、12小時、24小時、72小時、96小時）收集細胞樣品進行Western blot雜交，雜交信號以DAB顯色。M為蛋白標準分子量。
三、Bm91的亞細胞定位
應用免疫熒光的方法對Bm91進行亞細胞定位分析。分別收集病毒感染後24小時、48小時、72小時的BmN細胞，免疫雜交後在熒光共聚焦顯微鏡下進行觀察。結果顯示熒光在感染不同時間點細胞的細胞質和細胞核中都存在。
四、Bm91蛋白在病毒結構中的定位
分別純化收集BmNPV的BV和ODV病毒粒子。收集總蛋白，分別用Bm91多克隆抗體進行Western blot分析。結果顯示在ODV的蛋白樣品中能雜交到1條特異性條帶，而BV的總蛋白中則檢測不到。
進一步通過超速離心的方法分離純化得到ODV的囊膜和核衣殼，並用Bm91抗體分別對其蛋白進行免疫雜交分析。結果顯示Bm91為ODV囊膜上的蛋白，而在核衣殼上並未雜交到相應的特異蛋白條帶。
第三節 Bm91缺失和拯救型病毒的構建
一、Bm91基因打靶線性化片段的鑒定
以野生型BmNPV基因組DNA為模板，引物對91 US F/91 US R和91 DS F/91 DS R RCR擴增結果分別得到611bp大小的US和612bp大小的DS片段。以質粒pKOV Cm為模板用引物CmU和CmD擴增出1039bp Cm片段，電泳結果如圖586所示，擴增出的目的片段均與預期大小相符。