1材料
1.1儀器
LC-30A超高效液相色譜儀（日本島津公司），API4000+質譜儀（AB SCIEX公司）；HSC-24A型氮吹儀（天津市恒奧科技發展有限公司）；-70 ℃超低溫冰箱（海爾）；XW-80A型渦旋混合儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）；ST-16R型高速冷凍離心機（賽默飛世爾科技有限公司）；Mettler XS205型電子分析天平（梅特勒-托利多上海儀器有限公司）；Millipore Elix 5純水儀。
1.2試劑與試藥
銀杏內酯A（批號110862-201310）、銀杏內酯B（批號110863-201410）、白果內酯（批號110865-201306）均購於中國食品藥品檢定研究院；甲苯磺丁脲（tolbutamide，TOL，阿拉丁公司，批號T-0891）；甲醇為色譜純（Merck公司，批號1716507345）；甲酸為色譜純（美國ROE SCIENTIFIC INC，批號2B3026）；乙酸乙酯為分析純（南京化學試劑有限公司，批號12101511747）；水為純化水。
1.3動物
SD大鼠36隻，雄性，體重（200±20） g，由中國人民解放軍南京軍區醫學動物實驗中心提供，許可證號SCXK（軍）2012-0014。
2方法
2.1溶液的配製
2.1.1標準工作液的配製分別取GA，GB，BB對照品適量，用甲醇配製成質量濃度分別為5，5，30 mg·L-1的混標溶液，采用逐級稀釋的方法配製成係列混合標準工作液。
2.1.2內標溶液的配製取甲苯磺丁脲適量，精密稱定，用甲醇配製成質量濃度為10 mg·L-1的儲備液。精密吸取上述儲備液1 mL至50 mL量瓶，配製成質量濃度為200 μg·L-1的內標溶液。
2.2給藥方案與樣品采集
將SD大鼠隨機分成靜脈（iv）給藥組和灌胃（ig）給藥組，每組6隻。給藥劑量分別為：GA靜脈組（2 mg·kg-1），GA灌胃組（6 mg·kg-1）；GB靜脈組（4 mg·kg-1），GB灌胃組（12 mg·kg-1）；BB靜脈組（5 mg·kg-1），BB灌胃組（20 mg·kg-1）；實驗前12 h禁食不禁水，各組大鼠分別於給藥後0，5，15，30，60，120，240，360，480，720，1 440 min眼眶靜脈叢采血0.4 mL，肝素抗凝，5 000 r·min-1離心5 min，收集血漿，-70 ℃冰凍保存。
2.3分析條件
2.3.1色譜條件色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse plus C18柱（3.0 mm×50 mm，1.8 μm）；流動相甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫為0～3.5 min，35% A；3.5～6 min，35%～85% A；6～8 min，85%～35% A；8～10 min，35% A；柱溫為常溫； 流速為0.6 mL·min-1；進樣量4 μL。
2.3.2質譜條件離子源為ESI源；離子源溫度（TEM）550 ℃；霧化氣（GS1）和輔助氣（GS2）為氮氣，掃描方式為多反應監測（MRM），負離子模式；用於定量分析的檢測離子對為銀杏內酯A：m/z 453.1/351.1（碎裂電壓60 V/碰撞能量25 eV）；銀杏內酯B：m/z 423.1/367.1（90 V/20 eV）；白果內酯：m/z 325.0/163.1（70 V/20 eV）；內標（甲苯磺丁脲）：m/z 269.3/170.0（70 V/20 eV）。
2.4生物樣品預處理
分別取各給藥組大鼠血漿100 μL，加入300 μL含內標（甲苯磺丁脲200 μg·L-1）的乙酸乙酯溶液，渦旋混勻12 000 r·min-1離心5 min，取上清液後，下層再以300 μL乙酸乙酯同法萃取。合並2次上清液，於40 ℃下N2吹幹，100 μL甲醇複溶，離心，取上清液進樣。
2.5數據處理
數據處理均由AB Sciex Multi Quant 2.1軟件自動計算獲得，並采用DAS 2.0藥代動力學軟件，以非房室模型統計分析3種銀杏內酯類化合物的藥代動力學參數。絕對生物利用度的計算公式見下。
F=AUCig×DivAUCiv×Dig
式中D為給藥劑量，iv和ig分別表示靜脈注射給藥和灌胃給藥。
3結果
3.1方法學驗證
3.1.1特異性在擬定的分析條件下，得到大鼠空白血漿（KB）、對照品含藥血漿及給藥血漿樣品圖譜，GA，GB，BB保留時間分別為3.55，3.94，1.70 min，內標的保留時間為6.16 min。血漿中的內源性物質不幹擾3種銀杏內酯類化合物的測定，表明該方法專屬性良好。
3.1.2標準曲線與定量下限取大鼠空白血漿80 μL，分別加入係列標準工作液20 μL，使得GA，GB終質量濃度分別為5，10，50，100，200，500，1 000 μg·L-1，BB終質量濃度分別為10，100，200，500，1 000，3 000，6 000 μg·L-1，按2.4項下方法處理後進樣分析，以待測物的質量濃度（C，μg·L-1）為橫坐標，目標分析物與內標峰麵積比（Y）為縱坐標，采用加權（W=1/C2）最小二乘法進行回歸運算，得其線性回歸方程；同時製備6份定量下限（LLOQ）血漿樣本，考察方法的靈敏度。3種銀杏內酯類成分的回歸方程和線性範圍為GA：Y=0.000 22C+0.000 45，r=0.999 1，線性範圍5～1 000 μg·L-1；GB：Y=0.000 43C+0.001 9，r=0.997 9，線性範圍：5～1 000 μg·L-1；BB：Y=0.000 19C+0.000 19，r=0.998 2，線性範圍：10～6 000 μg·L-1。GA，GB，BB的定量下限（LLOQ）分別為5，5，10 μg·L-1，最低檢出限（LLOD，S/N≥3）分別為0.5，0.2，0.13 μg·L-1。