2.5微球形態和粒徑分布測定
將製備的微球於光學顯微鏡下觀察形態，每批測量並記錄500個微球的直徑，計算微球的平均粒徑、粒徑分布和粒徑的分散度。平均粒徑=∑500i=1n1d1/∑500i=1n1，式中d1，d2……di為微球的粒徑，n1，n2……ni分別為具有粒徑為d1，d2……di的微球的個數。分散度=（D90-D10）/D50，式中，D10， D50，D90分別指粒徑累積分布中10%，50%，90%處所對應的粒徑。ART-PLA微球的外觀為白色疏鬆粉末，加純化水後為白色混懸液。在光學顯微鏡下觀察，微球形狀圓整，分散性及流動性良好。在掃描電鏡下觀察，含藥微球表麵光滑，表麵未見有藥物黏附，釋放後微球表麵有微孔，這可能是微球內藥物由球內向外擴散的通道。微球的平均粒徑為101.7 μm，分散度為0.78，粒徑分布在50～150 μm的微球占83.6%。
2.6驗證性試驗
取研細的微球粉末適量，加乙腈0.5 mL，渦旋溶解，再用乙腈定容至1 mL，取適量用0.45 μm微孔濾膜過濾，20 μL進樣，HPLC測定ART的峰麵積，代入標準曲線方程，得樣品含量。由以下公式計算載藥量和包封率：載藥量=（微球中ART的含量/微球的質量）×100%，包封率=（微球質量×載藥量/所投ART的總量）×100%，測得平均載藥量為30.8%，平均包封率為53.6%，說明優化的製備工藝穩定，重複性良好。
2.7體外釋放
2.7.1檢測波長的確定加NaOH預處理後，在200～400 nm 對ART對照品磷酸鹽緩衝液（PBS，含乙醇28%）進行掃描，ART在289 nm附近有最大吸收，而空白輔料在此無幹擾吸收，因此將測定波長確定為289 nm。
2.7.2標準曲線的繪製精確稱取ART對照品21.3 mg，用無水乙醇1 mL溶解後，用PBS（含乙醇28%）溶液稀釋定容至1 000 mL，精密吸取0.5，1，1.5，3，4，6，8 mL至10 mL量瓶，分別加1 mol·L-1的NaOH 1 mL，並用PBS（含乙醇28%）溶液定容，於（50±1）℃水浴保溫45 min，迅速冷卻至室溫，以PBS（含乙醇28%）溶液為空白，在289 nm測定吸收度（A），ART溶液在1.065～ 17.04 mg·L-1，吸收度與濃度呈良好的線性關係，標準曲線方程為A=0.005 1C+0.009 3，R2=0.999。
2.7.3回收率測定取ART對照品適量，按標準曲線樣品製備方法，分別配置質量濃度約為2.13，6.39，12.78 mg·L-1的ART溶液，各加入50 mg空白聚乳酸微球溶液，按標準曲線項下方法處理，測定吸光度（A），按回歸方程計算回收率和相對平均偏差，回收率均大於98%，表明方法可行。
2.7.4精密度考察取ART對照品適量，按標準曲線樣品製備方法，分別配置質量濃度約為2.13，6.39，12.78 mg·L-1的ART溶液，每隔2 h測定紫外吸光度，連續測定5次，得日內精密度的RSD均小於1.3%；連續測定5 d，得日間精密度的RSD均小於1.4%。
2.7.5釋放度試驗由於中國藥典還未收載專用於微球體外釋放度測定的方法，因此本試驗中采用目前應用較多的透析法[8]。精確稱取按優選工藝製備的ART-PLA微球100 mg，裝入預先處理好的透析袋中，加入PBS（含乙醇28%）溶液4 mL，兩端紮緊，放入PBS（含乙醇28%）溶液200 mL的具塞玻璃瓶中，於（37±0.5）℃水浴恒溫振蕩，60次/min，定時取樣4.0 mL，並補加新鮮同溫釋放介質4.0 mL。取樣後按2.5.2項下方法處理並測定吸收度，根據標準曲線計算累計釋放率（Q），以Q對t作圖，並進行方程擬合。同時精確稱取ART原料藥30 mg，按上述處理方法同法處理，比較其與ART-PLA微球釋放的區別。ART-PLA微球在37 ℃的累積釋放曲線顯示ART原料藥4 h內藥物已基本釋放完全，而ART-PLA微球開始釋放較快，存在較強的突釋效應，之後隨著淺層藥物釋放完全和微球內藥物含量下降所致的勢能降低使得微球以較為恒定的速度緩慢釋放藥物，表明ART-PLA微球與ART原料藥相比體外釋放具有明顯的緩釋作用。對ART-PLA微球的累積釋藥率分別用零級動力學方程，一級動力學方程，Higuchi方程，Ritger-Peppas，Baker-Lonsdale及Weibull擬合，其釋藥規律符合一級動力學方程：ln（100-Q）= -0.055 3t+4.517 6（R2=0.983 5）。
3討論
本實驗製備的微球擬用於肝動脈栓塞給藥，微球粒徑不宜過大或過小，小於30 μm有可能通過動靜脈吻合處進入靜脈，而大於200 μm則難以對末梢動脈進行栓塞，往往形成側枝循環，使腫瘤組織重新獲得血供得以繼續生長，同時考慮到釋藥特性，故將微球粒徑確定在50～150 μm，並使平均粒徑接近100 μm[9-10]。
為了改善ART的水溶性差的特點，進行體外釋放試驗時在釋放介質中加入一定比例的乙醇加以改善。試驗考察釋放介質，選擇含有28%乙醇的PBS溶液。
由於ART本身紫外吸收波長在近紫外區（210 nm左右），所以ART的測定比較困難。所以在做體外釋放時，先在堿性條件下水解，並於289 nm處測紫外吸收值。
以PLA為原料，選擇PVA為乳化劑，采用O/W乳化-溶劑揮發法製得形態較好的ART-PLA微球。通過正交試驗得出製備平均粒徑約為100 μm左右ART-PLA微球的最佳工藝條件為：PLA質量分數為9.0%，PVA質量分數為0.9%，藥載比為1∶2，攪拌速度為1 000 r·min-1。按照優化處方製備6批ART-PLA微球，平均粒徑為101.7 μm，RSD 0.37%，平均載藥量30.8%，RSD 0.84%，平均包封率53.6%，RSD 0.62%。該製備工藝穩定，重複性良好。