反相離子對色譜法測定三七中三七素含量
化學
作者：李琳 王承瀟 曲媛 崔秀明
[摘要]建立反相離子對色譜法測定三七中三七素含量。通過超聲提取樣品中的三七素，並采用四丁基氫氧化銨離子對試劑與反相高效液相色譜法結合直接測定三七素含量。確定超聲提取優化條件為物液比為1∶20，連續超聲提取2次，每次15min，3500r·min-1，離心15min。三七不同生長年限、產地、部位、以及同屬植株中三七素含量均有差異：一年生三七莖葉三七素含量最高；紅河州樣品三七素含量高於文山州；真空冷凍幹燥方式優於其他加工方式；三七高於其他同屬植株。該檢測方法操作簡便，分離度好，穩定性好，適用於三七素含量直接測定，為三七中三七素的質量標準控製提供參考。
[關鍵詞]三七；三七素；高效液相色譜法；離子對試劑；含量測定
三七素（dencichine）是三七中止血活性的主要成分，它是一種特殊的非蛋白質氨基酸，相對分子質量小，極性大，水溶性好[12]。三七素最早被發現於山黧豆中，同時人參、西洋參種屬植物中也存在[34]。美國FDA在收載的三七藥材中，已將三七素作為重要質量控製指標進行定性檢測。但是目前國內現行藥品標準，如《中國藥典》2010年版、《雲南省飲片標準》2005年版對三七的質量標準控製主要集中在皂苷[78]，缺乏三七素定性和定量的評價。因此，采用適當的分析測試方法，對三七中三七素的含量進行係統地分析測定，有利於三七藥材的質量控製，有利於三七資源更好地開發和利用。
本文通過超聲提取工藝最佳優化條件進行三七素提取，采用反相離子對色譜法係統、全麵考察了三七不同生長年限、產地、部位、同屬植株以及加工方式三七素含量的影響，為三七中三七素的質量標準控製提供參考。
1材料
LC20A高效液相色譜儀（日本島津公司）；FLB200型萬能高速粉碎機（上海菲力博食品機械有限公司）；優普係列超純水器UPTI20T（成都超純科技有限公司）；CP114電子天平（上海奧豪斯儀器有限公司）；TD25WS台式低速離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司）。
三七素（上海銘睿生物有限公司、純度>98%）；甲醇（色譜級、Sigma公司）；四丁基氫氧化銨（aladin試劑公司）；超純水（來自優普係列超純水器），其他所有試劑均為國產分析純。
本實驗所用三七植株（經昆明理工大學，崔秀明研究員鑒定）均來源於雲南省各地區，采收期於2012年8—10月。經過不同的加工處理方式幹燥而成。
2方法與結果
2.1液相條件
島津LC20AB高效液相色譜儀，ThermoScientificHypersilGOLDC18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相0.3%四丁基氫氧化銨（A）甲醇（B）（磷酸調pH4.0）；梯度洗脫0.01～15min，15%～20%A；15～25min，20%～15%A；體積流量1mL·min-1；進樣量10μL；柱溫25℃；檢測波長220nm。
2.2三七素含量測定方法學考察
2.2.1對照品的製備精密稱取三七素對照品（相對分子質量為176.13）0.0176g，用水定溶於10mL量瓶中，製成濃度為10mmol·L-1的對照品儲備液。
2.2.2線性關係考察精密稱取2.2.1中的標準儲蓄液2，5，100，200，500，1000μL分別置於1mL量瓶中，加水定容，搖勻分別得到濃度為0.2，1，2，5，10mmol·L-1三七素對照品。分別精密吸取上述對照品10μL，按上述色譜條件測定。以峰麵積為縱坐標（Y），以濃度（X）為橫坐標進行線性回歸，在0.2～10mmol·L-1線性關係良好，三七素回歸方程為Y=2×106X-218414，r=0.9999。
2.2.3精密度試驗精密稱取按2.2.2的5mmol·L-1對照品，連續進樣6次，進樣體積10μL，記錄峰麵積，結果得出三七素的峰麵積RSD0.98%，表明儀器的精密度比較好。
2.2.4穩定性試驗準確稱取編號為3的主根樣品5份，按2.3.3項供試品溶液製備，分別在放置0，2，4，6，8，10，12，24，36，48h後，按上述色譜條件進樣10μL，結果表明三七素峰麵積RSD3.6%（n=10），三七中三七素在48h內穩定性良好。
2.2.5重複性試驗準確稱取編號為3的主根同一產地同一部位的樣品5份，按2.3.3項供試品溶液製備，按上述色譜條件進樣10μL，結果表明，三七中三七素的RSD0.16%，表明方法重複性良好。