脾腎陽虛泄瀉大鼠模型造模方法研究
藥理
作者：潘新 胡昌江 耿媛媛 趙玲 吳文輝 吳曉青 鍾振東
[摘要]脾腎陽虛泄瀉是中醫常見病症。迄今為止，還沒有理想的脾腎陽虛泄瀉大鼠模型可供研究。該文通過比較單因素（造模方法Ⅰ，注射氫化可的鬆+灌胃番瀉葉）和複合因素（造模方法Ⅱ，灌胃腺嘌呤+飲食失節+勞倦過度+灌胃番瀉葉）2種造模方法，以期建立符合中醫證候的脾腎陽虛泄瀉大鼠模型。該研究選取大鼠的腹瀉指數、尿D-木糖排泄率、NOS/cGMP信號傳導係統、髒器指數和病理組織學檢查等指標，分別對2個模型組大鼠進行比較評價。結果表明，與正常組相比，造模Ⅰ組、Ⅱ組大鼠的所有考察指標均有顯著性差異（P
[關鍵詞]脾腎陽虛；泄瀉大鼠模型；單因素；複合因素
[收稿日期]2014-04-16
[基金項目]國家自然科學基金麵上項目（81274085）
[通信作者]*胡昌江，教授，博士生導師，主要從事中藥炮製學的教學和科研，Tel：13980980796，E-mail
[作者簡介]潘新，博士研究生，主要從事中藥學研究，Tel：18607196428，E-mail
在中醫藥防病治病研究中，建立相關動物病理模型是關鍵。關於腎陽虛和脾陽虛的造模方法很多，如注射氫化可的鬆或灌胃腺嘌呤致腎陽虛；番瀉葉瀉下、飲食失節、勞倦過度等方法致脾陽虛，但脾腎陽虛泄瀉的模型鮮少研究。大量研究結果表明，腎陽虛病理動物模型方法大致有3種，即腎上腺皮質功能受抑製模型（注射糖皮質激素：氫化可的鬆）、甲狀腺功能受抑製模型（灌胃硫脲類藥物：甲基硫氧嘧啶）、性腺功能受抑製模型（灌胃腺嘌呤藥物）[1-4]。通過查閱文獻發現腎陽虛模型以氫化可的鬆模型最為常見，其次是腺嘌呤致腎陽虛模型，且有研究認為腺嘌呤致腎陽虛模型是屬於脾腎陽虛證，而甲狀腺功能受抑製模型報道鮮少。而關於建立脾陽虛證的動物模型，常采用苦寒瀉下（灌胃大黃或番瀉葉）、過勞及飲食失節等方法造模[5-7]。有文獻研究認為苦寒瀉下法中大黃所致脾陽虛模型病變程度相對較輕，且停用後恢複正常速度快，長期灌服可能會導致便秘。通過對文獻的整理和總結及中醫藥傳統理論指導下，本實驗擬出2套脾腎陽虛泄瀉的造模方法：單因素造模方法（氫化可的鬆+番瀉葉）、複合因素造模方法（腺嘌呤+飲食失節+勞倦過度+番瀉葉），從腹瀉指數、尿D-木糖排泄率、NOS/cGMP信號傳導係統、髒器指數和病理組織學檢查等幾個方麵對2組模型進行評價，旨在探索出符合中醫證候的脾腎陽虛泄瀉大鼠模型方法。
1材料
1.1動物
清潔級SD大鼠，雄性，體質量200～220g，由四川達碩動物實驗中心提供。實驗動物合格證號0002568，生產許可證號SCXK（川）2013-24。國家中醫藥管理局中藥藥理三級科研實驗室（No.TCM-03-043）。
1.2儀器
352型芬蘭酶標儀；AC8型芬蘭洗板機；TG16W微量高速離心機（國產）；GNP-9080型隔水式恒溫培養箱（國產）；Thermo可調式移液器（上海雷勃分析儀器有限公司）；BP211DAG電子天平（德國Sartorius）；徠卡-1015切片機（德國徠卡公司）；TSJ-Q型全自動封閉式組織脫水機（常州市中威電子儀器有限公司）；BMJ-Ⅲ型包埋機（常州市中威電子儀器有限公司）；PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀（常州市中威醫療儀器有限公司）；Olympus-BX40光學顯微鏡（日本Olympus公司）。
1.3試劑及試藥
大鼠環磷酸鳥苷（cGMP）ELISA試劑盒（上海尚樂生物科技有限公司，批號201310-X02）；一氧化氮合酶（NOS）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號20131120）；D-木糖（成都市科龍化工試劑廠，批號20120929）；對溴苯胺（天津市光複精細化工研究所，批號20121018）；硫脲（成都市科龍化工試劑廠，批號20120919）；氫化可的鬆注射液（天津藥業集團新鄭股份有限公司，批號120627）；腺嘌呤（成都貝斯特試劑有限公司，批號D110160）；番瀉葉（購於成都市藥材市場）。
對溴苯胺溶液：對溴苯胺2g溶於100mL以硫脲飽和過的冰乙酸上清液，當天配用，避光保存。腺嘌呤混懸液：臨用前用蒸餾水配置成濃度為200g·L-1混懸液。番瀉葉：加水煮沸約10min後用2層紗布過濾，濾液減壓濃縮成1.0g·mL-1的藥液。
2方法
通過預試驗發現大鼠體重過輕時在造模過程中死亡率較高，體重在300g左右開始造模效果較好，故飼養大鼠至300～320g，隨機分組。將60隻SD雄性大鼠隨機分為正常、造模Ⅰ、造模Ⅱ等3組。除正常組外，其餘各組大鼠按以下方法分別造模。