糖尿病患者結合珠蛋白基因多態性與冠脈狹窄相關性研究
臨床研究
作者：潘巍巍 王雲英 解麗豔 王述琦 趙琛 範茜 劉萍 於楠楠 張七一
[摘要] 目的探討糖尿病患者結合珠蛋白基因多態性與冠狀動脈狹窄嚴重程度的相關性。方法選擇98例糖尿病合並冠心病患者以及77例單純糖尿病患者，采用PCR-SSP技術檢測結合珠蛋白基因型，據此對糖尿病合並冠心病患者進行分組，采用Gensini冠狀動脈評分係統（Gensini積分）對冠狀動脈的狹窄程度進行評分。結果糖尿病合並冠心病組Hp基因型分布與單純糖尿病組相比差異有統計學意義，表現為Hp2-2基因型在糖尿病合並冠心病組的頻率明顯高於單純糖尿病組（0.55 vs 0.35，P 50%確診為冠心病。采用Gensini 冠狀動脈評分係統（Gensini 積分）對冠脈的狹窄程度進行評分。根據冠脈造影結果，將冠脈分成14段，狹窄程度以最嚴重處為標準：狹窄直徑≤25%記1分，狹窄直徑25%～50%記2分，狹窄直徑51%～75%記4分，狹窄直徑76%～90%記8分，狹窄直徑91%～99%記16分，狹窄直徑100%記32分。病變血管不同節段權重係數：左主幹×5，前降支近段×2.5，前降支中段×1.5，前降支遠段×1，回旋支近段×2.5（開口處×3.5），回旋支遠段、鈍緣支、右冠狀動脈、後降支及第1對角支均×1，第2對角支及後側支×0.5。
1.1.2 排除標準所有對象均做血常規、肝腎功、血脂、血糖、糖化血紅蛋白、12導聯心電圖、胸片、心髒彩超，除外既往經皮冠狀動脈成形術或冠脈旁路移植術、心髒瓣膜病、結締組織病、惡性腫瘤、肝腎功能不全、嚴重創傷、手術或感染。半月內服用過他汀類調脂藥、非甾體類消炎藥、抗生素等藥物的患者，均不能入選本研究。
1.2 Hp基因型的檢測
采集受試者的靜脈血2 mL，EDTA抗凝，置於離心機內以1 800 rpm離心10 min，分離出血漿。用天根公司提供的血液基因組DNA提取試劑盒提取受試者血液DNA。參考Werner Koch[3]對Hp基因分型的PCR實驗方法進行分型檢測。用引物A和B擴增Hp1特異性的1 757 bp片段，用引物C和D擴增Hp2特異性的349 bp片段。上遊引物A：5’-GAGGGGAGCTTGCCTTTCCATTG-3’，下遊引物B：5’-GAGATTTTTGAGCCCTGGCTGGT-3’，上遊引物C：5’-CCTG-CCTCGTATTAACTGCACCAT-3’，下遊引物D：5’-CCGAGTGCTCCACATAGCCATGT-3’。PCR反應體係為模板DNA 5 μL，10×Tap plus Buffer（with MgCl2）2.5 μL，2.5 mmol/L dNTP Mixture 2 μL，10 μmol/L上下遊引物各0.5 μL，Tap plus DNA聚合酶（2.5 U/μL）0.5 μL，加入ddH2O補至25 μL體係。擴增條件：95℃預變性2 min，95℃變性1 min，69℃退火和延伸2 min（A和B擴增時）或1 min（C和D擴增時），共35個循環後72℃終末延伸7 min。PCR產物以1%的瓊脂糖凝膠電泳，經125 V 30 min，在紫外光下觀察，攝影。
1.3 統計學處理