1.2 主要試劑與藥物
三硝基苯磺酸(TNBS)為Sigma公司產品(批號：107K5008)。黃芪注射液購於成都地奧九泓製藥廠。LN試劑盒購於武漢博士德生物工程有限公司。SOD試劑盒購自南京建成生物工程研究所。
1.3 方法
1.3.1 模型建立 SD大鼠隨機方法等分成5組，每組10隻，分別為正常組、模型正常組、低劑量黃芪幹預組(400mg/kg)、中劑量黃芪幹預組(800mg/kg)、大劑量黃芪幹預組(1600mg/kg)。除正常組外，其餘4組大鼠術前禁食12h，胺碘酮(100mg/kg體重)腹腔注射麻醉，沿腹白線做正中切口，夾閉胰膽管近肝門端，通過恒流泵向十二指腸乳頭注射2%TNBS乙醇磷酸鹽緩衝液0.4mL，1h注完，關閉恒流泵後維持壓力10min，以防藥物回流，手術過程嚴格無菌操作[2]。為防止大鼠脫水，每天皮下注射生理鹽水2次，每次6mL，直至大鼠能自由飲水。術後禁食72h後給予常規飲食。於術後72h用不同劑量的黃芪肌肉注射至術後28d。
1.3.2 檢測指標和方法 所有所有觀察對象抽取靜脈血，分離血清，置於-20℃低溫冰箱中備用。實驗前將血清置室溫複溶，轉離心，取上清液進行測定。采用光度酶聯免疫分析法(ELISA)檢測胰腺正常組、對照組、幹預組中的LN的含量。SOD試劑盒采用黃嘌呤氧化酶法測其總活力。
1.4 統計學處理
實驗數據應用SPSS11.0統計軟件係統分析處理。各組間計量資料均采用(χ±s)表示。含量正常組和黃芪處理組的比較采用Dunnet t檢驗，各個黃芪處理組之間的比較采用LSD-t檢驗。
2 結果
2.1 胰腺組織病理學改變
對照組大鼠胰腺明顯病理變化。模型組大鼠造模4周後，可見胰腺間質炎性細胞浸潤，管周纖維組織增生，胰管增生擴張，管周及胰腺小葉間和小葉內纖維化伴炎症細胞浸潤，局部腺體萎縮壞死，腺泡空泡樣變。幹預組較模型組纖維化程度明顯減少。見圖1、表1。將五組大鼠胰腺組織病理切片進行纖維化評分，發現模型組大鼠胰腺纖維化程度遠遠高於幹預組，有顯著差異。
2.2 胰腺血清中LN含量與SOD活性的變化
SD大鼠正常組與對照組比較，對照組發生明顯的胰腺纖維化，LN的含量明顯升高，SOD活性明顯降低。黃芪幹預組中胰腺纖維化程度減輕，小中大劑量組均使LN含量降低(P
2.3 黃芪幹預組中各劑量組的療效
見圖2、3。
由圖2可以看出，小、中、大劑量組的幹預均有療效，其中以大劑量組療效最為明顯。
3 討論
近年來，隨著膽道疾病發病率的上升，慢性胰腺炎的發病率亦呈現出上升的趨勢。目前，雖然我們對於膽道疾病的治療取得了很大的進展，但對於慢性胰腺炎依舊缺乏有效的治療措施。慢性胰腺炎的臨床結果是胰腺外分泌和內分泌功能的降低，但其病理生理基礎卻是胰腺的不斷纖維化[3]。胰腺纖維化的形成有多種細胞因素的參與，與氧自由基、脂質過氧化產物等密切相關，黃芪有抗脂質過氧化、抗氧自由基的作用[4-5]。目前我們已經通過動物實驗證實，黃芪對肝髒的纖維化具有治療作用，而肝髒纖維化與胰腺纖維化在發病機製上類似，這為對慢性胰腺炎的治療提供了理論依據[6]。
LN屬結構性蛋白，存在於基底膜的透明層中，在胰腺纖維化時沉積於胰腺血竇，使胰腺血竇毛細血管化，增加胰腺竇阻力，使胰腺血清中LN含量增高[7]，與胰腺纖維化密切相關。SOD是機體中抗氧自由基的關鍵酶類，對機體的氧化與抗氧化起著至關重要的作用，在胰腺中含量豐富，對胰腺抗氧自由基損傷有重要作用。
黃芪是扶正補氣的中藥，其主要成分是黃芪皂甙、黃芪多糖等，具有提高免疫功能，抗氧化、抗腫瘤等多種生物活性，亦有報道黃芪有抗肝、腎、肺纖維化作用[8-9]。黃芪主要成份是黃芪總黃酮(TFA)、黃芪總皂甙(TPA)和黃芪總多糖(TSA)。有報道表明黃酮類物質抗氧化清除自由基的主要機理是酚輕基類基團在與過氧化物作用時，通過提供氫原子，發生氧化還原反應而發揮作用[10]。從Kitagawa等測定黃芪總皂甙的幾種分子結構式可以看出，黃芪中的皂貳類成分為含有一個以上的酚輕基基團的多環狀化合物，其結構與黃酮類化合物類似，黃芪中總黃酮和總皂甙類成分清除自由基，是其結構中的酚經基基團與自由基反應而發揮功效。我國學者劉星諧等認為黃芪總皂甙清除自由基作用的機理是由於含有以環黃芪醇為甙元的糖甙，這些糖甙與自由基發生反應，阻止了新的自由基生成，從而抑製機體氧化應激的作用，提高SOD活性抑製機體纖維化。