糖化血紅蛋白的單克隆抗體製備及鑒定
基礎醫學
作者：項嶽暉 盧玲玲 塗斐佩等
[摘要] 目的 采用雜交瘤技術製備糖化血紅蛋白的單克隆抗體並對其進行鑒定，為開發糖化血紅蛋白ELISA 試劑盒提供特異性材料。 方法 通過用順丁烯二酰亞胺法製備免疫抗原，通過BALB/c小鼠進行多層次免疫，通過細胞培養融合，HAT培養基篩選雜交瘤細胞，使用G蛋白層析法、硫酸銨鹽析法等對細胞進行純化。單抗亞類鑒定采用小鼠單克隆抗體亞型鑒定試劑盒。 結果 通過細胞融合、培養、篩選、克隆等，最後篩選出1株能穩定分泌特異性抗體的雜交瘤細胞株，命名為N5B4；細胞培養上清液體效價為1∶5000，腹水效價為1∶100萬；通過標準曲線計算樣品中人糖化血紅蛋白的濃度為99.2%。 結論 經過篩選獲得高特異性、高靈敏度的KET單克隆抗體細胞株。
[關鍵詞] 糖化血紅蛋白；單克隆抗體；糖尿病黃斑水腫
[中圖分類號] R446.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2015）11-0022-03
[Abstract] Objective Using hybridoma technique and screened hybridoma cell strains stably， efficiently secreted anti glycosylated hemoglobin monoclonal antibody to provide specific material for the development of glycosylated hemoglobin ELISA kit. Methods The immune antigen was prepared by maleimide method， multi-level immune mice by BALB/c， through cell culture fusion， screening of hybridoma cell culture medium HAT， ammonium sulfate salting out method and G protein chromatography. Monoclonal antibody subclasses were identified by monoclonal antibody subtype identification Kit operation. Results Through cell fusion， screening and cloning culture， etc.， the final selection screened 1 strain stably secreting specific antibody hybridoma cell line， named N5B4； cell culture supernatant liquid was 1∶5000， ascites titer was 1∶100 million； a standard curve to calculate the concentration in the sample human glycated hemoglobin was 99.2%. Conclusion After KET monoclonal antibody cell line to obtain a high specificity and high sensitivity of screening.
[Key words] Glycosylated hemoglobin； Monoclonal antibody； Diabetic macular edema
糖化血紅蛋白（HbA1c）是一種非酶糖化產物，其對氧的親和力明顯高於正常的血紅蛋白，血液中HbA1c水平增高會阻礙氧在組織中擴散，導致組織缺氧壞死。HbA1c水平增高也會加重視網膜缺氧狀態，進一步加重毛細血管擴張，滲漏明顯增加，最終導致CSME加重和治療效果不佳[1，2]。研究表明，DME治療效果僅與HbA1c水平有關，血糖水平的高低對其無明顯影響，這可能與HbA1c的水平反映測定前8～12周血糖的平均水平，血糖濃度的波動對其影響不大，因此，是一項評估糖尿病控製效果的重要指標[3]。因此檢測HbA1c的水平，對於臨床治療糖尿病性黃斑水腫有極其重要的意義。本研究利用雜交腫瘤技術製備並篩選出高特異性、高靈敏度的KET單克隆抗體細胞株，為開發糖化血紅蛋白ELISA 試劑盒提供特異性材料，現報道如下。
1 資料與方法