轉化生長因子β1和白細胞介素17與變應性結膜炎相關性研究
五官醫學
作者：李雯霖 何愛群 卓曉等
[摘要] 目的 探討過敏性結膜炎患者TGF-β1和IL-17的表達水平。 方法 對我院治療的過敏性結膜炎患者和健康人群的TGF-β1和IL-17的表達水平進行檢測，探討在各型過敏性結膜炎患者中的表達強度。 結果 過敏性結膜炎患者TGF-β1和IL-17水平高於健康人群，差異有統計學意義（P
0.05）。 結論 過敏性結膜炎患者TGF-β1和IL-17 表達水平高於正常健康人群。TGF-β1和IL-17在各型過敏性結膜炎患者中表達強度不同，在春季角結膜炎表達水平明顯高於其他類型。 [關鍵詞] TGF-β1；IL-17；過敏性結膜炎 [中圖分類號] R276.7 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2015）11-0069-03 [Abstract] Objective To investigate the expression level of transforming growth factor β1 （TGF-β1） and interleukin 17 （IL-17） in patients with allergic conjunctivitis. Methods TGF-β1 and IL-17 expression levels in allergic conjunctivitis patients hospitalized in the author’s hospital and a healthy population were detected to explore the expression level in all types of patients with allergic conjunctivitis. Results TGF-β1 and IL-17 levels were significantly higher in patients with allergic conjunctivitis than in healthy population （P0.05）. Conclusion Patients with allergic conjunctivitis have higher TGF-β1 and IL-17 expression levels than normal healthy people. TGF-β1 and IL-17 expression level vary in different subtypes of allergic conjunctivitis， vernal keratoconjunctivitis has higher expression level than other types in spring. [Key words] TGF-β1； IL-17； Allergic conjunctivitis 變應性結膜炎是眼科門診患者中常見的引起眼部不適的疾病，且反複發作，給患者帶來極大的痛苦。因此，對此病的防治已引起眼科同仁的高度重視，但目前其發病機製仍不十分清楚，為從根本上治愈變應性結膜炎， 揭示其發生機製已成為目前眼科醫師需要迫切解決的問題。轉化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）在炎症和組織修複等方麵都具有重要的調節作用。IL-17（Interleukin-17）可以通過促進釋放促炎細胞因子來放大炎症反應，從而誘導自身免疫性疾病及引起慢性變應性疾病的發生。本課題擬研究變應性結膜炎患者血清中TGF-β1和IL-17的水平，從而初步探討TGF-β1和IL-17在其發病過程中的作用，有望為變應性結膜炎的防治開辟新的途徑。 1 對象與方法 1.1研究對象 實驗組200例，均為2013年6月～2014年6 月我院眼科門診收集的變應性結膜炎患者，年齡11～46 歲，其中男78例，女122例。其中季節性變應性結膜炎、常年性變應性結膜炎、春季角結膜炎、特應性角結膜炎均為50例，分別設為實驗組1、實驗組2、實驗組3和實驗組4，另選健康人群50例為對照組，年齡15～42歲，男21例，女29例。實驗組臨床症狀和體征符合各臨床亞型的診斷標準。具有眼部奇癢、畏光、流淚、眼瞼水腫、瞼結膜乳頭與濾泡增生、球結膜充血水腫等臨床表現，並有明確的過敏原接觸史，或過敏原雖不明確，但在某一特定的環境下容易發病，常伴有哮喘、鼻炎和濕疹等病史。健康對照組均為社會健康誌願者，眼部均無上述症狀，檢查眼病無異常，無變應性疾病家族史。因巨乳頭性結膜炎多有配戴軟性角膜接觸鏡史，臨床上少見，未納入研究對象。所有入組的研究對象近1個月內無藥物應用史，全身各係統體檢無異常。實驗組與對照組性別、年齡差異無統計學意義（P>0.05）。本文涉及的所有實驗都經過患者或家屬同意，並簽署知情同意書。 1.2 儀器與試劑 TGF-β1和 IL-17均采用酶聯免疫吸附法（ELISA）進行檢測。ELISA 檢測試劑盒購置於晶美生物公司。嚴格按照試劑盒說明書進行操作。細胞因子單位為pg/mL。 1.3 方法 1.3.1 標本采集 實驗組和對照組均常規采集外周靜脈血8 mL，其中2 mL用於分離血清，-80℃凍存備用。6 mL用肝素抗凝，用於分離外周血單個核細胞。 1.3.2 TGF-β1和 IL-17檢測方法 使用細胞裂解儀裂解實驗組和對照組細胞後，將裂解液低溫高速離心，分裝上清液，-20℃保存。ELISA法檢測血中TGF-β1和IL-17含量。具體操作按試劑盒說明書進行，具體步驟如下：①包被：每個反應孔中加0.1 mL用包被緩衝液稀釋的抗體（該抗體的蛋白質含量為1～10 μg/mL），4℃過夜，次日用洗滌緩衝液洗滌3遍，每遍3 min。②加樣：在上述已包被的反應孔中加一定稀釋的上清液0.1 mL置37℃孵育1 h，然後洗滌，同時做對照組。③加酶標抗體：將稀釋的酶標抗體0.1 mL加入各反應孔中，37℃孵育1 h，然後洗滌。④加底物液顯色：將臨時配置的TMB底物溶液0.1 mL加入各反應孔中，37℃孵育30 min。⑤終止反應：將2M硫酸0.05 mL加入各反應孔中終止反應。⑥檢測結果：在ELISA檢測儀上波長450 nm處，以空白對照孔調零後測各孔OD值，若大於規定的陰性對照OD值2.1倍，即為陽性。 1.4統計學處理 應用SPSS 16.0 統計學軟件建立數據庫進行統計分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，行t檢驗和方差分析，P 2 結果 血中TGF-β1和IL-17的表達：與對照組比較，各實驗組患者血中TGF-β1和IL-17的表達均明顯高於對照組，差異具有顯著性（P0.05）。 3 討論 變應性結膜炎是一類常見的眼表過敏性疾病，其發病率高達20%[1]。該病最主要的症狀是眼癢，常有結膜充血、水腫、乳頭和濾泡等體征。臨床多見季節性變應性結膜炎、春季角結膜炎、特應性結膜炎和常年性變應性結膜炎，而巨乳頭狀結膜炎因常與戴角膜接觸鏡史有關，在臨床較為罕見。 TGF-β家族包括TGF-β的3個亞型（TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3），其中TGF-β1是調節多種細胞生長、分化和細胞周圍基質環境的多功能細胞因子，存在於氣道上皮、黏膜下層和平滑肌層。TGF-β1 可誘導大量炎性細胞趨化，還可延長某些免疫炎性細胞，如T淋巴細胞、巨噬細胞和中性粒細胞的存活期，同時在某些情況下TGF-β可誘導B淋巴細胞、T淋巴細胞和巨噬細胞的增殖。TGF-β對調節細胞外基質的形成起著關鍵作用，TGF-β的持續產生可致細胞外基質的無序沉積，從而導致組織重塑。研究發現TGF-β1 在氣道重塑中起重要作用，是氣道重塑中的重要細胞因子[2，3]，可促進其發生及發展，從而參與哮喘的發生，其可能的發病機製是在氣道損傷的修複過程，如果抗原反複刺激氣道引起持續的慢性炎症，可導致TGF-β1持續過度產生，引起組織纖維化、氣道重建及氣道慢性阻塞[4，5]。另有研究表明，過敏性鼻炎患者鼻黏膜上皮細胞TGF-β1的免疫活性明顯升高，提示TGF-β1在過敏性鼻炎的發生發展過程可能起著重要作用[6，7]。 IL-17是Th17 細胞的主要效應因子[8，9]。目前越來越多的研究證實IL-17與過敏性哮喘、過敏性鼻炎及特應性皮炎等變應性疾病的免疫炎症反應有關。有動物實驗發現，在急性氣道炎症中，IL-17 可以誘導氣道內平滑肌細胞產生IL-8和嗜酸細胞活化趨化因子-1（eotaxin-1），這些趨化因子的大量分泌促使中性粒細胞廣泛浸潤。中性粒細胞在哮喘發病中扮演了重要的角色[10，11]，IL-17能夠分別活化NF-κB、p38促分裂原活化蛋白激酶和細胞外信號調節激酶等信號激酶，誘導大量的化學介質和炎症趨化因子產生，調節嗜酸粒細胞的功能，放大炎症反應[12]。在過敏性鼻炎組中Th17 細胞有明顯的表達，IL-17 水平也明顯增高。Ciprandi等[13]發現，在持續性花粉過敏鼻炎中，血清IL-17 表達水平與鼻炎嚴重程度呈正相關。Larsen等[14]研究證實，IL-17/Th17參與了特應性皮炎發病的免疫病理過程，包括接觸過敏原時天然免疫及適應性免疫反應。總之，目前越來越多的研究證實IL-17與過敏性哮喘、過敏性鼻炎及特應性皮炎等變應性疾病的免疫炎症反應有關。 綜上，本研究發現，與對照組比較，各型變應性結膜炎患者血中TGF-β1和IL-17的表達明顯高於對照組，差異具有顯著性（P [參考文獻] [1] Gomes PJ. Trends in prevalence and treatment of ocular allergy[J]. Curr Opin Allergy Clin Immunol，2014，14（5）：451-456. [2] Halwani R，Al-Muhsen S，Al-Jahdali H，et al. Role of transforming growth factor β in airway remodeling in asthma[J]. Am J Respir Cell Mol Biol，2011，44（2）：127-133. [3] Ghanei M，Ghalejooghi NA，Nourani MR，et al. Effect of TGFβ1 and TIMP2 on disease activity in asthma an