(6)化學發光法:采用雙抗原夾心法原理進行檢測,用TP抗原包被磁微粒,辣根過氧化物酶標記TP抗原製備酶結合物,通過免疫反應形成抗原—抗體—抗原—酶複合物,該複合物催化發光底物發出光子,發光強度與TP抗體的含量成正比。
(四)儀器試劑
酶標儀、全自動或半自動化學發光分析儀及其相配套的試劑、洗板機、水浴鍋、離心機、加樣器等。
(五)操作規程
按照試劑說明書、所用儀器方法SOP進行測定。
(六)結果判定
1.ELISA法
(1)臨界值(bsp;=陰性對照OD均值+0.18(各試劑廠家設置有所不同),陰性對照OD值小於0.05時以0.05計算。
(2) 陽性:樣品的OD值SbrCO≥1,初篩結果為陽性者應作TPPA檢測確證,如凝集不明顯,為可疑,建議其複查。
(3)陰性:樣品的OD值SbrCO<1。
2.TP-PA法
(1)判定標準
2+:形成均一凝集,凝集顆粒在孔底呈膜狀伸展。
1+:孔底形成較大的環狀凝集,外周邊緣不均勻。
±:孔底形成小環狀凝集,外周邊緣光滑、完整。
-:顆粒在孔底聚集成紐扣狀,邊緣光滑。
(2)結果判定
陽性:標本與非致敏顆粒(最終稀釋為1∶40)反應,顯示為(-);但與致敏顆粒(最終稀釋為1∶80)反應,顯示為(+),或如(+)的稀釋倍數為1∶80以上,則以(+)的最終稀釋倍數為抗體滴度。
陰性:無論未致敏粒子呈現何種反應,隻要標本與致敏顆粒(最終稀釋度為1∶80)反應圖像顯示為(-),最終判定為陰性。
可疑:標本與未致敏顆粒(最終稀釋度為1∶40)反應,顯示為(-);標本與致敏顆粒(最終稀釋度為1∶80)反應,顯示為(±)時,最終判定為可疑。
3.乳膠層析快速法
(1)陽性(+):兩條紫紅色帶出現。一條位於測試區內(T), 另一條位於質控區內(C)。
(2)陰性(-):僅質控區內(C)出現一條紫紅色條帶,在測試區內(T)無紫紅色條帶出現。
(3)無效:質控區內(C)未出現紫紅色條帶,表明不正確的操作過程或試劑盒已變質損壞。
4.TRUST法
陽性反應(R)(3+~4+):可見中等或較大的紅色凝集塊。
弱陽性反應(W)(1+~2+):有較小或小的紅色凝集塊,
任何強度的凝集都報告陽性。
陰性反應(N):僅見細小紅色粗糙物聚於中央一點,但非凝集。
5.快速血漿反應素試驗:參考反應標準圖片以陽性(4+、3+)(R),弱陽性(2+、1+)(W),或陰性(-)(N)記錄結果。
(七)質控及注意事項
1.ELISA法用水浴加熱時,用溫度計觀察水浴鍋溫度。
(6)化學發光法:采用雙抗原夾心法原理進行檢測,用TP抗原包被磁微粒,辣根過氧化物酶標記TP抗原製備酶結合物,通過免疫反應形成抗原—抗體—抗原—酶複合物,該複合物催化發光底物發出光子,發光強度與TP抗體的含量成正比。
(四)儀器試劑
酶標儀、全自動或半自動化學發光分析儀及其相配套的試劑、洗板機、水浴鍋、離心機、加樣器等。