1.4雲芝
人體在正常的生命活動中需要多種微量元素,某些處於無機態的微量元素不能被人體直接吸收。利用某些藥用真菌作為載體,通過液體發酵培養,可以將不能直接吸收的無機態轉化為有機態,成為可直接吸收利用的微量元素。雲芝液體培養富硒的研究解決了這一問題。在雲芝的培養基中加入一定濃度的Na2SeO3,經液體培養後,將所得的菌絲進行測定,雲芝菌絲體中有機硒含量隨著培養基中添加硒濃度的提高而升高,菌絲體數量明顯下降。以硒添加量20mg/kg為最佳,富集在菌絲體內硒的濃度是添加濃度的20倍。製成含硒雲芝粉適合人體服用。廢棄的發酵液還可再用於加進固體養料中栽培其它食用菌。注意到雲芝的特性及食用性,在雲芝的生產中采用了懸浮培養法,較其栽培法生產周期大大縮短。製成的渾濁汁成品質量穩定。酸爽柔和,營養豐富,具有雲芝獨特的風味和藥理保健作用。
1.5金針菇
通過單因子試驗統計分析,篩選出金針菇FV088的適宜培養基和搖瓶培養條件。試驗用培養基選用糧食作物,取材方便便於推廣。在金針菇雜交19號富鋅能力研究中發現,添加300~2500mg/kg的鋅離子,於26℃,13r/min條件下培養其富鋅能力較好。金針菇的生物富集作用受培養基成分、微量元素濃度的影響,提高培養基中蛋白質、脂肪、鋅的濃度,有利於金針菇對鋅的富集。
1.6羊肚菌
羊肚菌液體搖瓶培養條件及適用培養基的篩選結果表明,PYG培養基(含0.1%酵母提取物的PDA),適宜的液體培養條件為:25℃,100r/min,裝量100mL三角瓶,pH7.5。另外通過正交試驗篩選的搖瓶培養基為麥芽汁50%,玉米粉1.5%,酵母提取物0.5%,蔗糖1.5%。1.7其它研究猴頭菌深層發酵過程中pH值、總糖、還原糖、氨基酸態氮、菌絲球的數量、大小等變化,確定了用於配製飲料或營養液的搖瓶培養基及最佳發酵時間,以4%的葡萄糖為碳源,大豆蛋白腖和酵母粉為氮源或再加0.3%CMC,初始pH為4~5,搖瓶培養8天,發酵液有猴頭菇的清香味。分離純化後的野生蛹蟲草斜麵菌種,經液體培養獲得的菌球,可在米飯培養基上成功地培育出子實體。進一步實驗結果顯示蛹蟲草胞外多糖的最佳培養基為:玉米粉4%,黃豆粉0.6%,酵母汁0.3%,K2HPO4 0.05%,MgSO4 0.05%,接種量3%,pH5.5。在25℃培養144小時,胞外多糖產量可達1.83g/L。試驗中發現碳源因子對多糖產量影響極顯著,C/N比高,有利於次生代謝物的積累。冬蟲夏草是名貴的藥用真菌,野生資源被極度采集致使資源愈來愈少,市場貨源緊缺。近年來,應用生物技術發酵工程,進行了冬蟲夏草發酵生產,其培養基配方為葡萄糖2.5%,蛋白腖0.7%,玉米漿0.5%,酵母粉0.5%,CaCO3 0.15%,KH2PO4 0.15%,pH自然,培養的蟲草菌絲體含甘露醇3.36%,與天然的冬蟲夏草成分相似,用於代替野生冬蟲夏草。
2.優化菌種
為了開拓藥用真菌的生產潛力,提高液體發酵水平,獲得更多的目的產物,除尋找最佳培養條件外,應選育最佳的菌種。在選育優質菌種時通常采用紫外誘變技術。以灰樹花Gr9801為出發菌株,采用紫外線連續誘變,經分離純化、馴化等方法,以斜麵生長速度和液體搖瓶發酵產多糖總量為監測指標,篩選出一株遺傳上相對穩定的適應液體培養的灰樹花菌株-GrUV04,該菌株在綜合PDA培養基上生長速度快,菌體豐滿純白。馴化後在液體培養基中發酵生長力強,生物量達1.97%,發酵多糖總量達216mg/100mL。分別較出發菌株提高129.1%和75.6%。對靈芝原生質體進行了紫外誘變處理,經過粗篩和精篩,選出多糖含量明顯高於原始菌株的新品種,經過10代的PDA培養基及搖瓶試驗和多次3噸罐的中試試驗,表明所得的誘變株確實在產量及多糖含量上超過原來菌株,從小試、中試的結果看該菌株的性狀比較穩定。
3.分析手段
隨著藥用真菌發酵技術的發展,對發酵產物的分析手段也不斷提高。在對天然和發酵培養冬蟲夏草中的腺苷、尿苷、鳥苷等3種核苷類成分的含量的測定中采用了高效毛細管電泳法。
在利用薄層層析法進行靈芝有效成分的定性分析中,選用甲苯—乙酸乙酯—乙酸(12∶4∶0.5)為展開劑,以硫酸—甲醇(1∶1)為顯色劑,通過矽膠薄層色譜法由靈芝發酵產物中分離得到3種四環三萜酸,並測定了這3種物質的紫外光譜。在雲芝菌絲體提取物雲芝糖肽中糖和蛋白質的含量及分子量測定中采用了快速、分辨率高和重現性好的高效液相凝膠滲透色譜法(HPGPC)。用梯度凝膠法分離電泳比較金針菇液體培養菌絲體與子實體的同工酶,電泳凝膠精密度掃描圖譜比較表明,菌絲體中SOD同工酶譜帶與子實體的基本相同。
4.其他發酵產物
所含成分十分複雜,不同提取方法結果差異很大。對雲芝菌株結合蛋白多糖的分析比較中分別采用了熱水提取、稀堿提取、乙醇沉澱等方法。結果顯示,水提物多糖含量遠高於堿提物,堿提物的蛋白含量高於水提物。通過色譜圖顯示,水提物中的組分數比堿提物少,可見水提物中雜質少於堿提物。
5.小結
藥用真菌液體發酵培養技術可以進行工業化連續生產,其規模大、產量高、發酵周期短,具有廣泛的發展前景。但是在藥用真菌發酵研究中應當注意:1.藥用真菌有效成分的研究。
發酵液中所包含的成分極其複雜,真正有益的成分很難說清。加強這方麵的研究可以更準確把握其作用機理,以便用於臨床。2.優良菌種的選育。應選育出適應性強,遺傳性狀穩定,目的產物得率高的菌種。3.對發酵設備和發酵技術的改進。連續發酵設備和技術是沿用
抗生素生產所用的設備,有許多需完善之處。4.采用現代化學分析手段,豐富質量鑒定內涵。