一、細菌、放線菌常用培養基
1.牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基(又稱普通營養瓊脂培養基)
成分:蛋白腖10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂15~18g,蒸餾水1000mL,pH7.2~7.4。
製法:將除瓊脂以外的各成分溶解於蒸餾水中,以1mol/L NaOH溶液校正pH至7.2~7.4,加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂完全溶解,分裝三角瓶(分裝量以三角瓶容積的1/2~2/3為宜),121℃滅菌20min後備用。若製備斜麵培養基則趁熱分裝試管(分裝量以試管高度的1/4為宜),121℃滅菌20min後擺成斜麵備用。
用途:此培養基可供一般細菌培養之用。如用於菌落計數,瓊脂量為1.5%;如做成平板或斜麵,則應為2%。
2.牛肉膏蛋白腖半固體培養基
成分:蛋白腖10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,蒸餾水1000mL,瓊脂4~5g,pH7.4。
製法:將除瓊脂以外的各成分溶解於蒸餾水中,以1mol/L NaOH溶液校正pH為7.2~7.4,加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂完全溶解,分裝試管(分裝量以試管高度的1/3為宜),121℃滅菌20min後直立凝固備用。
用途:此培養基培養細菌,供動力觀察、菌種保存、H抗原位相變異試驗等用。
3.牛肉膏蛋白腖液體培養基(又稱營養肉湯)
成分:蛋白腖10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,蒸餾水1000mL,pH7.4。
製法:將各成分溶解於水中,以1mol/L NaOH溶液校正pH為7.4,分裝三角瓶(分裝量以三角瓶容積的1/2~2/3為宜)或試管(分裝至試管高度的1/4左右為宜),121℃滅菌20min備用。
用途:此培養基一般用於細菌培養。
4.無氮培養基
成分:甘露醇(或葡萄糖)10g,磷酸二氫鉀(K2HPO4·3H2O)0.2g,硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.2g,氯化鈉0.2g,CaSO4·7H2O 0.2g,CaCO3 5g,蒸餾水1000mL,pH7.2~7.4。
製法:將各成分溶解於蒸餾水中,以1mol/L NaOH溶液校正至pH7.0~7.2,分裝三角瓶或試管,121℃滅菌20min。
用途:用於培養自生固氮菌。
5.高氏一號(澱粉硝酸鉀)培養基
成分:可溶性澱粉20g,KNO31g,氯化鈉0.5g,磷酸氫二鉀0.5g,硫酸鎂0.5g,磷酸二氫鉀(FeSO4·7H2O)0.01g,瓊脂15~20g,蒸餾水1000mL,pH7.2~7.4。
製法:配製時,先用少量冷水將澱粉調成糊狀,倒入煮沸的水中,在火上加熱,邊攪拌邊加入除瓊脂外的其他成分,以1mol/L NaOH溶液校正pH為7.2~7.4,加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂完全溶解,分裝三角瓶(分裝量以三角瓶容積的1/2~2/3為宜),121℃滅菌20min後備用。若製備斜麵培養基則趁熱分裝試管(分裝量以試管高度的1/4為宜),121℃滅菌20min後擺成斜麵備用。
用途:常用於培養、分離放線菌。
6.澱粉銨鹽培養基
成分:可溶性澱粉10g,(NH4)2SO42g,磷酸氫二鉀1g,硫酸鎂1g,氯化鈉1g,CaCO3 3g,蒸餾水1000mL,pH7.2~7.4。
製法:將各成分溶解後,校正pH至7.2~7.4,分裝三角瓶,121℃滅菌20min。若加入瓊脂15~20g即成固體培養基。
用途:用於培養放線菌。
7.葡萄糖蛋白腖(肉湯)培養基
成分:葡萄糖5g,蛋白腖6g,酵母浸膏(粉)6g,牛肉浸膏(粉)1.5g,吐溫-800.1%,瓊脂15~20g,蒸餾水1000mL,pH7.4。
製法:將各成分溶解後,校正pH至7.4,分裝試管與三角瓶,115℃滅菌20min。
用途:用於食品防腐劑抑菌試驗。
8.胰酪腖大豆肉湯
成分:胰酪腖(或胰蛋白腖)17g,植物蛋白腖(或大豆蛋白腖)3g,氯化鈉5g,磷酸氫二鉀2.5g,葡萄糖2.5g,蒸餾水1000mL。
製法:將各成分溶解後,加熱並輕輕攪拌並溶解,分裝後,115℃高壓滅菌15min,最終pH為7.3±0.2。
用途:用於食品防腐劑抑菌試驗。
9.月桂基硫酸鹽胰蛋白腖(LST)肉湯
成分:胰蛋白腖或胰酪腖20.0g,氯化鈉5.0g,乳糖5.0g,磷酸二氫鉀(無水)2.75g,磷酸氫二鈉(無水)2.75g,月桂基硫酸鈉0.1g,蒸餾水1000mL,pH6.8±0.2。
製法:將上述成分溶解於蒸餾水中,調節pH,分裝到有玻璃小倒管的試管中,每管10mL,121℃高壓滅菌15min。
用途:用於大腸菌群檢驗。
10.煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯
成分:蛋白腖10.0g,乳糖10.0g,牛膽粉(oxgall或oxbilc)溶液200.0mL,0.1%煌綠水溶液13.3mL,蒸餾水1000mL,pH7.2±0.1。
製法:將蛋白腖、乳糖溶於500mL蒸餾水中,加入牛膽粉溶液200.0mL(將脫水牛膽粉溶於200mL蒸餾水中,pH7.0~7.5),用蒸餾水稀釋到975mL,調節pH至7.4,再加入0.1%煌綠水溶液13.3mL,用蒸餾水補足到1000mL,用棉花過濾後,分裝到有玻璃小倒管的試管中,每管10mL。121℃高壓滅菌15min。
用途:用於大腸菌群檢驗。
11.結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)
成分:蛋白腖7.0g,酵母膏3.0g,乳糖10.0g,氯化鈉5.0g,膽鹽或3號膽鹽1.5g,中性紅0.03g,結晶紫0.002g,瓊脂15~18g,蒸餾水1000mL,pH7.4±0.1。
製法:將上述成分溶於蒸餾水中,靜置幾分鍾,充分攪拌,調節pH。煮沸2min,將培養基冷卻至45~50℃傾注平板。使用前臨時製備,不得超過3h。
用途:用於大腸菌群檢驗。
二、酵母菌、黴菌常用培養基
1.麥芽汁瓊脂培養基
成分:10°Bx或12°Bx新鮮麥芽汁1000mL,瓊脂15~20g,pH5.5~6.0。若製備半固體培養基,在10°Bx或12°Bx麥芽汁中加入0.4%~0.5%瓊脂。
製法:將一定量的幹麥芽粉碎,加4倍於麥芽質量的60℃水,在55~65℃水浴鍋中保溫糖化3~4h,糖化時要不斷攪拌,並每隔一定時間取樣,加碘液1~2滴檢查糖化程度,如顯藍色,說明糖化尚未徹底,直至碘液無藍色反應為止。糖化完畢,用4~6層紗布過濾,除去殘渣。如果濾液混濁不清,可用雞蛋清澄清。其方法是:將一個雞蛋清加水約20mL,調勻至生泡沫,倒入糖化液中攪拌煮沸再用紗布和脫脂棉過濾,即可得澄清麥芽汁。每1000g麥芽粉能製得15~18°Bx的麥芽汁3500~4000mL,再加水稀釋成10°Bx或12°Bx的麥芽汁,用糖度計檢測糖化液濃度。校正pH至5.5~6.0,分裝試管或三角瓶,如製備固體培養基,分裝三角瓶後,按麥芽汁量加入1.5%瓊脂。115℃滅菌20min。
幹麥芽製法:取新鮮大麥或小麥若幹,用水洗淨,浸泡6~12h,置於15℃陰暗處發芽,上蓋紗布,每日早、中、晚各淋水一次,麥根伸長至麥粒兩倍時,即停止發芽,攤開曬幹或烘幹,貯存備用。
用途:用於培養酵母菌。
2.豆芽汁固體培養基
成分:豆芽汁1000mL,磷酸氫二銨1g,氯化鉀0.2g,硫酸鎂0.2g,瓊脂20g。
製法:將除瓊脂以外的各成分溶解於蒸餾水中,以1mol/LNaOH溶液校正pH6.2~6.4,加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂完全溶解,分裝三角瓶(分裝量以三角瓶容積的1/2~2/3為宜),121℃滅菌20min後備用。若製備斜麵培養基則趁熱分裝試管(分裝量以試管高度的1/4為宜),121℃滅菌20min後擺成斜麵備用。
豆芽汁製備:將黃豆芽或綠豆芽200g洗淨,在1000mL中煮沸30min,紗布過濾得豆芽汁,補足水分至1000mL。
用途:一般用於培養酵母菌和黴菌。
3.高鹽察氏培養基
成分:硝酸鈉2g,磷酸二氫鉀1g,硫酸鎂0.5g,氯化鉀0.5g,硫酸亞鐵0.01g,氯化鈉60g,蔗糖30g,瓊脂15~20g,蒸餾水1000mL。
製法:加熱溶解,分裝後,121℃滅菌20min。必要時可酌量增加瓊脂。
用途:用於黴菌的計數、分離。
4.孟加拉紅培養基
成分:蛋白腖5g,葡萄糖10g,磷酸二氫鉀1g,硫酸鎂0.5g,瓊脂20g,1/3000孟加拉紅溶液100mL,蒸餾水1000mL,氯黴素0.1g。
製法:將除氯黴素、孟加拉紅溶液的上述各成分加入蒸餾水中溶解後,再加孟加拉紅溶液。另用少量乙醇溶解氯黴素,加入培養基中,分裝後,於121℃高壓蒸汽滅菌20min。
用途:用於黴菌和酵母菌計數、分離。
5.察氏培養基
成分:NaNO3 2g,磷酸氫二鉀1g,硫酸鎂0.5g,氯化鉀0.5g,硫酸亞鐵0.01g,蔗糖30g,瓊脂15~20g,蒸餾水1000mL。
製法:加熱溶解,分裝後121℃滅菌20min。
用途:用於培養、鑒定曲黴和青黴及其他利用硝酸鹽的真菌、放線菌。
注:察氏培養基又稱蔗糖硝酸鈉培養基,蔗糖可用葡萄糖代替而成葡萄糖硝酸鹽培養基。
6.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(簡稱PDA)
成分:馬鈴薯(去皮)200g,葡萄糖(或蔗糖)20g,瓊脂20g,蒸餾水1000mL。
製法:將馬鈴薯去皮、洗淨、切成小塊,稱取200g加入1000mL蒸餾水,煮沸20min,用紗布過濾,濾液補足水至1000mL,再加入糖和瓊脂,溶化後分裝,121℃滅菌20min。另外,用少量乙醇溶解0.1g氯黴素,加入1000mL培養基中,分裝滅菌後可用於食品中黴菌和酵母菌計數、分離。
用途:用於培養、分離、計數酵母菌和黴菌。
7.馬鈴薯瓊脂培養基
成分:馬鈴薯(去皮)200g,瓊脂15~20g,蒸餾水1000mL。
製法:同馬鈴薯葡萄糖瓊脂。
用途:用於鑒定黴菌。
8.玉米粉蔗糖瓊脂培養基
成分:玉米粉60g,磷酸氫二鉀3g,維生素B1 100mg,蔗糖10g,硫酸鎂0.5g,蒸餾水1000mL。
製法:將玉米粉加入蒸餾水中,攪勻,文火煮沸1h,紗布過濾,再加入其他成分,加熱溶化瓊脂,補足水量至1000mL,分裝後121℃滅菌20min。維生素B1單獨滅菌15min後另加。
用途:用於鑒定假絲酵母及黴菌。
9.大米粉培養基
製法:將不含熒光物質的秈米挑去雜質和變質米粒,磨成粗粉,分裝後121℃滅菌20min。
用途:用於黴菌產毒。
三、乳酸菌常用培養基
1.脫脂乳培養基
成分:牛奶,蒸餾水。
製法:將適量的牛奶加熱煮沸20~30min,過夜冷卻,脂肪即可上浮。除去上層乳脂即得脫脂乳。將脫脂乳盛在試管及三角瓶中,封口後置於滅菌鍋中在108℃條件下蒸汽滅菌10~15min,即得脫脂乳培養基。
用途:用於培養活化乳酸菌。
2.乳清瓊脂培養基
成分:乳清500mL,蒸餾水500mL,乳水解酪蛋白5g,葡萄糖1g,酵母膏25g,瓊脂(處理)15g,pH6.5。若分離、計數乳酸菌可在培養基中加入1.6%溴甲酚綠(BGG)酒精溶液1mL。
製法:將上述各成分加熱溶解於乳清中,調整pH至6.5,加入經過處理的瓊脂。若製斜麵培養基需加熱溶解瓊脂,分裝試管;若製平板培養基可直接移入三角瓶中,並按裝量加入1.5%瓊脂,121℃滅菌20min,傾注平板。
乳清的製備:稱取乳清粉100g加入90℃的1000mL蒸餾水中溶解(先將水加熱,而後加入乳清粉,以防糊底)。取6~8mL的1mol/L HCl溶液倒入上述1000mL乳清粉液中,調pH4.5左右(最好一次調成),90℃保持30min,使酪蛋白大量析出凝結成塊。用脫脂棉和紗布過濾得到乳清,再用1mol/L NaOH溶液將乳清調回pH6.5,而後煮沸,再用濾紙過濾,分裝於三角瓶中,121℃滅菌20min備用。
用途:用於培養、分離乳酸球菌和杆菌。
3.MRS培養基
成分:葡萄糖20g(或10g),蛋白腖10g,牛肉膏10g,酵母粉5g,檸檬酸二銨2g(或檸檬酸鈉5),磷酸氫二鉀2g,乙酸鈉5g,硫酸鎂0.58g(或0.2g),MnSO4·4H2O 0.25g(或0.05g),吐溫-801mL,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,pH6.2~6.4(若培養乳酸球菌則應調節pH為6.8~7.0)。
製法:將硫酸鎂、MnSO4、葡萄糖、吐溫-80以外的各成分溶解,冷卻至50℃,以醋酸調節pH為6.2~6.4或pH為6.8~7.0,而後加入硫酸鎂和MnSO4,最後加入葡萄糖和吐溫-80,分裝三角瓶中,按量加入1.5%瓊脂,121℃滅菌15min備用。
用途:用於培養乳酸杆菌。
4.改良MRS瓊脂培養基
成分一:在1000mL MRS培養基中加入5g乳酪蛋白水解物,蛋白腖加量減至5g,其他成分不變。
成分二:在1000mL MRS培養基中加入3~4g玉米漿、0.3~0.4g半胱氨酸鹽酸鹽,其他成分不變。
製法:同MRS培養基配法。
用途:用於培養、分離、計數乳酸菌。
注:若分離乳酸菌應在改良MRS瓊脂培養基中,臨用時加入2%~3%CaCO3(事先用硫酸紙包好滅菌);若待分離樣品汙染真菌還應加入0.15%納他黴素(事先用2mL 0.1mol/L NaOH溶解)或加入0.2%山梨酸或0.5%山梨酸鉀。若計數乳酸菌還應加入80μg/mL TTC(紅四氮唑)指示劑。
5.酸化MRS瓊脂培養基
成分:同MRS培養基配方。
製法:將各成分按順序煮沸溶解後,冷卻至50℃,用醋酸調節pH5.4,冷卻至室溫(25℃),用酸度計檢查,分裝三角瓶中,按量加入1.5%瓊脂,121℃滅菌20min備用。
用途:用於分離、計數乳酸杆菌。
6.番茄汁瓊脂培養基
成分:番茄汁原液30mL,蒸餾水970mL,蛋白腖5g,酵母膏2.5g,葡萄糖1g,乳水解酪蛋白5g,瓊脂(處理)15g,pH6.5~6.8。若分離、計數乳酸菌可在培養基中加入1.6%溴甲酚紫酒精溶液1mL。若分離樣品汙染真菌還應加入0.15%納他黴素(事先用2mL 0.1mol/L NaOH溶解)。