一、實驗目的
（1）進一步學習並掌握光學顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用方法。（2）了解並觀察放線菌的形態特征。
二、實驗原理放線菌是指能形成分枝絲狀體或者菌絲體的一類革蘭氏陽性菌，常見的放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養基表麵或深入培養基內生長的叫基內菌絲（簡稱基絲），基絲長到一定程度還能向空氣中生長出氣生菌絲（簡稱氣絲），並進一步分化產生孢子絲以及孢子。有的放線菌隻產生基絲而無氣絲。能否產生菌絲體及由菌絲體分化產生的各種形態特征是放線菌分類鑒定的重要依據。觀察放線菌的形態特征常用插片法、玻璃紙法和印片法。
三、實驗器材（1）菌種：放線菌（灰色鏈黴菌，Streptomycesgriseus）3～5d培養物。（2）試劑和培養基：01%美蘭染色液、高氏Ⅰ號瓊脂培養基。（3）儀器或其他用具：滅菌的平皿、滅菌蓋玻片、載玻片、接種環、接種鏟、鑷子、顯微鏡、擦鏡紙、雙層瓶等。
四、實驗步驟
插片法觀察放線菌的形態。（1）接種：用接種環挑取菌種斜麵培養物接種到斜麵試管培養基中。（2）培養：28℃培養3～5d。（3）倒平板：取高氏Ⅰ號瓊脂培養基融化並冷卻至約50℃後倒平板，凝固待用。（4）接種：用接種環挑取斜麵培養物（孢子）在平板上劃線接種。（5）插片：以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以45°角插入瓊脂內（插在接種線上），如圖5\|1，插片數量根據需要而定。圖5\|1插片法觀察放線菌
1—蓋玻片2—培養基左：側麵右：正麵
（6）培養：倒置28℃培養3～5d。（7）鏡檢：用鑷子小心拔出一片蓋玻片，擦去背麵培養物，然後將有菌的一麵朝上放於載玻片上，幹燥、固定，用01%美蘭染色1min，觀察時用暗光，先低倍鏡後高倍鏡，最後用油鏡觀察。
五、實驗記錄
觀察放線菌的基內菌絲、氣生菌絲有何差別，孢子絲有何特征，並繪圖說明。
六、思考題
（1）放線菌與細菌的菌落有何不同？（2）鏡檢時如何區分放線菌的基內菌絲和氣生菌絲？
參考文獻
［1］肖明，王雨淨.微生物學實驗［M］.北京：科學出版社，2008.
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