一、實驗目的
（1）掌握高產穀胱甘肽酵母菌的一般篩選方法。（2）掌握酵母菌種穀胱甘肽的測定方法及其實用性。
二、實驗原理
穀胱甘肽（GSH），即L\|γ\|穀氨酰\|L\|半胱氨酰\|甘氨酸，是生物體內一種重要的活性三肽，由穀氨酸、半胱氨酸、甘氨酸通過肽鍵縮合而成，是細胞內存在的最豐富的小分子硫醇類化合物。自1921年Hopkins首先發現穀胱甘肽的存在以來，GSH不僅作為試劑廣泛應用於醫學、生物學、化學和生物化學的研究測定中，而且成為一種重要的生物化學藥物。穀胱甘肽作為機體內重要的生物活性巰基物質，對維持生物體內合適的氧化還原環境起著重要的作用。在人體中具有解毒、抗氧化和防衰老的生理功能，直接或間接地參與蛋白質和DNA的合成、物質的運輸和細胞的保護作用，應用前景廣闊。人體所需的GSH可部分從各種食物中攝取，但因飲食結構、年齡和適應力的不同，體內GSH的供應會不足。為了維持體內GSH的平衡，適當補充GSH對健康是十分必要的。穀胱甘肽廣泛存在於動物、植物及微生物體內，其中以酵母、穀物種子、胚芽、人體和動物的心髒、肝髒、腎髒、紅細胞及眼睛晶狀體中含量最高。GSH在釀酒酵母中含量極高，達（100～1000）mg/100g，可以直接食用食品中的營養酵母以獲取GSH，因此工業上篩選GSH產量高的菌株一般來源於釀酒酵母。穀胱甘肽（GSH）的測定方法有高效液相色譜法、5，5\|二巰基\|2\|硝基苯甲酸法（DTNB）、一溴代胺熒光標記法、四氧嘧啶法、亞硝基鐵氰化鈉以及碘量法等。這些方法有的利用GSH的巰基反應，有的利用GSH的還原反應，各有優缺點。三、材料和方法（一）樣品采集和菌種來源市售的麵包酵母菌粉，或者澱粉和糖類的食物如麵包、饅頭等在溫度高於20℃條件下經幾天放置已經發酵的樣品。
（二）培養基（1）YEPD培養基（斜麵培養及平麵純化用）：葡萄糖20g，蛋白腖20g，酵母膏10g，瓊脂糖20g，水1000mL，pH60。（2）種子培養基：葡萄糖20g，蛋白腖20g，酵母膏10g，水1000mL，pH60。（3）搖瓶培養基：酵母膏5g，葡萄糖30g，（NH4）2SO450g，KH2PO460g，K2SO436g，MgSO415g，FeSO40008g，MnSO40008g，水1000mL，pH60。
（三）主要儀器紫外分光光度計、高效液相色譜儀（配紫外檢測器）。
（四）主要試劑
（1）磷酸鹽緩衝液：取磷酸二氫鈉680g，庚烷磺酸鈉220g，用磷酸調pH至30，加超純水定容至1L。（2）Tris\|HCl緩衝液：用Tris生化試劑加超純水配製，用鹽酸調pH至8，濃度為025mol/L。（3）DTNB（5，5\|二巰基\|2\|硝基苯甲酸）溶液：用DTNB生化試劑加005mol/L磷酸鹽緩衝液配成001mol/L的溶液，存於棕色瓶中，置低溫暗處備用，使用時用025mol/LTris\|HCl緩衝液配成01mmol/L的DTNB溶液。（4）磺基水楊酸溶液：取磺基水楊酸60g，加水定容至100mL，質量濃度為60g/L。
四、實驗步驟
（一）菌種分離和純化將采集的樣品在種子培養基中富集培養，30℃，200r/min，12h，用無菌水稀釋到10－5，10－6，10－7，塗布到YEPD平板上。挑起單菌落，在YEPD培養基進行劃線分離純化，得到純化菌株，鏡檢，保留酵母菌株，將生長良好的菌種接種斜麵保藏。