培養基和試劑的配製
一、牛肉膏蛋白腖培養基(用於細菌培養)牛肉膏3g蛋白腖10gNaCl5g瓊脂15~20g水1000mLpH7.0~7.2121℃濕熱滅菌20~30min。
二、高氏1號培養基(用於放線菌培養)
可溶性澱粉20gKNO31gNaCl0.5gK2HPO4·3H2O0.5gMgSO4·7H2O0.5gFeSO4·7H2O0.01g瓊脂20g水1000mLpH7.2~7.4配製時,先用少量冷水將可溶性澱粉調成糊狀,再倒入煮沸的水中,在火上加熱,邊攪拌邊加入其他成分,溶化後,補充水分至1000mL。121℃濕熱滅菌20~30min。
三、革蘭氏染色液
(1)草酸銨結晶紫染液:結晶紫乙醇飽和液(結晶紫2g溶於20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸銨水溶液80mL,將兩液混勻置24h後過濾即成。此液不易保存,如有沉澱出現,需重新配製。
(2)盧戈(Lugol)氏碘液:碘1g,碘化鉀2g,蒸餾水300mL。先將碘化鉀溶於少量蒸餾水中,然後加入碘使之完全溶解,再加蒸餾水至300mL即成。配成後貯於棕色瓶內備用,如變為淺黃色則不能使用。
(3)95%乙醇:用於脫色,脫色後可選用以下(4)或(5)的其中一項複染即可。
(4)稀釋石炭酸複紅溶液:堿性複紅乙醇飽和液(堿性複紅1g,95%乙醇10mL,5%石炭酸90mL混合溶解即成堿性複紅乙醇飽和液),取石炭酸複紅飽和液10mL加蒸餾水90mL即成。
(5)番紅溶液:番紅O(safranine,又稱沙黃O)2.5g,95%乙醇100mL,溶解後可貯存於密閉的棕色瓶中,用時取20mL與80mL蒸餾水混勻即可。以上染液配合使用,可區分出革蘭氏染色陽性(G+)或陰性(G-)細菌,G-被染成藍紫色,G+被染成淡紅色。
四、生理鹽水NaCl9g蒸餾水1L最後濃度為0.9%。
五、5%孔雀綠水溶液孔雀綠5.0g,蒸餾水100mL。
六、番紅水溶液番紅0.5g,蒸餾水100mL。
七、美蘭染液在52mL95%乙醇和44mL四氯乙烷的三角燒瓶中,慢慢加入0.6g氯化美藍,旋搖三角燒瓶,使其溶解。放置5~10℃下,12~24h,然後加入4mL冰醋酸,用濾紙過濾。貯存於清潔的密閉容器內。
八、呂氏(Loeffier)美藍染色液A液:美藍(methyleneblue,又名甲烯藍)0.6g,95%乙醇30mL。B液:0.01%KOH100mL。混合A液和B液即成,用於細菌單染色,可長期保存。根據需要可配製成稀釋美藍液,按1∶10或1∶100稀釋均可。
九、乳酸石炭酸棉藍染色液(用於真菌固定和染色)石炭酸(結晶酚)20g,乳酸20mL,甘油40mL,棉藍0.05g,蒸餾水20mL。將棉藍溶於蒸餾水中,再加入其他成分,微加熱使其溶解,冷卻後用。滴少量染液於真菌塗片上,加上蓋玻片即可觀察。黴菌菌絲和孢子均可染成藍色。染色後的標本可用樹脂封固,能長期保存。
十、saline\|EDTA\|PVP溶液0.15MNaCl,0.1MEDTA,2%PVP(W/V)。
十一、20mg/mL溶菌酶準確稱取0.2g溶菌酶,加水溶解,定容至10mL,用0.22μm無菌濾膜過濾,儲存於-20℃,備用。
十二、5MNaAc溶液準確稱取68.05gNaAc,加水溶解並定容至100mL。室溫保存。
十三、25%SDS準確稱取10g高純度的SDS置於100~200mL燒杯中,加入約80mL的去離子水,68℃水浴溶解,滴加濃鹽酸調節pH值至7.2,將溶液定容至100mL後,室溫保存。
十四、0.5mol/LEDTA(pH8.0)在800mL水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉,在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調節溶液的pH值至8.0(約需20gNaOH顆粒),然後定容至1L,分裝後高壓滅菌備用。
十五、50×TAE緩衝液242gTris,57.1mL冰醋酸,100mL05mol/LEDTA(pH8.0),定容至1L,高壓蒸汽滅菌,室溫保存。