與其他行商不同，伍秉鑒很願意嚐試新的投資領域，他有時投資並不單單是為了獲得利益，還為了得到一個好的名聲和心理上的滿足。19世紀初期，隨著外國商人在廣州口岸的日益增多，歐美基督新教的傳教士也看上了中國這片土地。
1835年，第一位美國傳教醫生伯駕來到廣州，但由於中國一向推崇儒家的思想，注重現世，不關心彼岸世界，所以基督教一直以來都受到人們的排斥。伯駕看到在中國的傳教效益甚微，便轉而利用醫學途徑作為傳教的輔助手段，創辦了廣州眼科醫局，開始了以醫療活動為手段，以傳教為目的的“醫學傳教”曆程，同時也開始了美國醫學在中國的傳播。伯駕隻是個剛從耶魯大學醫學係畢業的博士生，要想創辦一個相當規模的眼科醫局並非易事，所以他找到了當時號稱“世界第一富翁”的伍秉鑒。
麵對伍秉鑒，伯駕把創辦眼科醫局，並以此作為拯救中國人民的途徑向伍秉鑒講述了一遍。伍秉鑒念他處處急中國人之急，想中國人所想，便答應捐出10萬元銀元建立醫局。在當時，伍秉鑒的這一舉動實屬首例。因為伯駕來中國的目的是傳教，所以為了博得中國人民的信任，他所創辦的醫局不收取任何醫療費用，那麼伍秉鑒的這10萬銀元也就相當於一個沒有任何收益的投資。
1835年11月4日，伯駕終於開設了“眼科醫局”，但由於中國人的傳統觀念，對西醫總持疑懼態度，因此眼科醫局的開業並不是一帆風順。開業第一天，醫局門可羅雀，直到第二天才來了一位患青光眼的婦女就診，第三天又來了六個病人。而後，醫局的情形才慢慢地轉好。在伯駕的治療下，隨著病人病情的好轉，人們的恐懼和疑惑逐漸消失，開始認同這個西方人主持的西醫醫局，就醫人數也逐漸多起來了。
伯駕經營廣州眼科醫局長達20年之久，一直到他從政，醫局業務才由另一位美國傳教士嘉約翰主持。在嘉約翰的主持下，醫局逐漸成為初具規模的西醫院，並正式命名為博濟醫院，此名沿用至今。雖然伍秉鑒的這次投入沒有任何利潤，但他因此獲得了極高的聲譽，使他在以後的商業活動中更加順利，並載入了中國的史冊，這也使他成了一個比較有爭議的曆史人物。
伍秉鑒的投資活動並不僅限於中國，更能表現其膽略和風範的是參與美國的證券和鐵路建設的投資。1837年，24歲的美國商人約翰·穆瑞·福布斯回到美國。8年前他前往中國時，還是一位不名一文的學徒。在中國，福布斯以販賣茶葉為生，並認下了一位義父——伍秉鑒。而就是因為這層關係，在他回美國時口袋裏竟多出了50萬墨西哥銀元的資金，他在美國利用這筆錢開始了一門新生意——修鐵路，而後福布斯成了橫跨北美大陸最大的鐵路承建商。
另外，伍秉鑒還獨立購買了美國的證券，並且向美國的鐵路建設進行了多次投資。在他多方麵投入的同時，也為自己換來了更多的收益，使他成了一位名副其實的跨國財團首領。
另外，伍秉鑒還憑借自己雄厚的財力籠絡其他行商。十三行雖然是由官方組織起來的社會團體，可是行商的內部關係錯綜複雜，常常因生意產生激烈的競爭，甚至相互傾軋。於是，伍秉鑒便對這些行商恩威並用，就在英商公司要求伍家獨立擔任羽紗銷售代理人時，他則要求將利潤按比例分給全體行商。
後來，老行商劉德章因得罪英商公司失去了貿易份額，伍秉鑒出麵斡旋，恢複了他的份額。行商黎光遠破產充軍伊犁，伍家又同外商籌款捐助他在流放地的生活費。
從1811年起，伍家就利用其雄厚資金，協助英商公司向瀕於破產的大多數行商進行放債，其債款數額就高達二百餘萬元，使大多數資金薄弱的行商都願意聽從伍家的安排。因而，怡和行也逐漸成為了一個令人敬仰和羨慕的大型跨國財團。