在法國南部的汝拉省的多爾，有個名叫尤拉縣的小鎮，有一條不起眼的稱作愛波斯科塞斯的小河從鎮中緩緩流過，1822年12月27日路易斯·巴斯德就降生在這座小鎮上。有人開玩笑說，像巴斯德這樣的大人物出世，應當是有天上的音樂相送的，可小巴斯德出生時，和普通孩子似乎沒什麼兩樣，同樣啼哭掙紮。小巴斯德的童年是在愛波斯科塞斯小河邊度過的，他喜歡和小夥伴們在河邊追逐打鬧，翻跟頭，捏泥人，常弄得滿身髒泥才回家。他父親名叫約瑟夫·巴斯德，在當地一家製革廠工作。據說這位老巴斯德以前曾當過兵，當年跟隨拿破侖在西班牙和法國本土征戰，因作戰勇敢很受上司賞識，還榮獲過1802年法國政府頒發的勳章，並在1814年4月5日有幸受到拿破侖的接見。巴斯德的母親是一位聰慧、善良、善解人意、想象力豐富的女性。巴斯德很愛他的父母，父母也異常疼愛他，他們盼望孩子將來能有出息。
轉眼之間，小巴斯德已到了上學的年齡，父母把他送到了鎮上的一所小學讀書。父母第一次送他到學校門口，突然，他出神地停住了腳步，校園裏傳出了孩子們的琅琅讀書聲，他異常的興奮，書本、課堂、老師、新的夥伴，學校的一切對他都是新鮮的。父母希望他能當個好學生，可起初小巴斯德念書成績很一般，一點也看不出有什麼與眾不同的地方。每逢上語文課，老師總愛把全班同學分成幾組，每組挑出一位成績最好的同學站在全班同學麵前高聲朗讀課文。這榮譽對小巴斯德來說簡直太具有吸引力了，他多麼盼望自己能被選上，可惜，他從未享受過這份殊榮，他懊喪極了。這件事在他幼小的心靈裏留下了很深刻的印象。
小巴斯德是個不怕吃苦、性格倔強的孩子，他對功課越來越認真。每次做數學題，他都反複推敲，直到真正弄明白為止。對於老師布置的作業，他常常比別人多花2～3倍的時間來完成。為此，有些同學嘲笑他腦子笨，可他不以為然，他覺得，隻有這種認真的態度，才能使自己學得紮實。就這樣，功夫不負有心人，小巴斯德靠著這種在學習上精益求精、鍥而不舍的精神，終於在中學畢業時成了班上的一名優秀生，也正是這種精神為他以後在科學上的成功奠定了堅實的基礎。
老巴斯德沒讀過什麼書，可十分明理，他很敬重讀書人，希望自己的兒子能讀很多書，有出息，幹出一番大事業。他為人熱情、善良，有許多朋友，一天他專程到愛波斯大學校長洛曼雷第家中拜訪，談到了小巴斯德將來的前途。洛曼雷第不僅學識淵博，而且很有頭腦，他認為年輕人應該到高等學府裏去繼續學習深造才有前途，並告訴老巴斯德，巴黎有一所很有名的師範大學，小巴斯德如能在那裏學習，將來他一定能成為一名很好的教師，或許還能當大學教授。老巴斯德欣然接受了洛曼雷第校長的建議，決定送愛子到巴黎求學。正是洛曼雷第校長的這番勸告，決定了小巴斯德一生的命運。