一、實訓目標
（1）學會高效液相色譜儀的使用方法。
（2）學會高效液相色譜法在中藥材及中藥製劑定量分析中的應用。
二、實訓原理
葛根素屬異黃酮類化合物，具有擴張冠狀動脈、增加血流量、降低心肌耗氧量等作用。在進行中藥製劑質量控製和製定藥品標準時，對含有黃酮類成分的中藥製劑常以黃酮類成分作為該製劑的藥效學指標進行定性定量分析。
高效液相色譜法是測定單體黃酮含量較為成熟的方法。多采用反相色譜法，用C18鍵合相固定相，流動相常用甲醇-水-乙酸（或磷酸緩衝液）及乙腈-水，檢測器主要采用紫外檢測器或熒光檢測器。
三、主要儀器及試藥
儀器：高效液相色譜儀、C18色譜柱。
試藥：葛根素對照品、甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、乙醇；葛根藥材及葛根芩連丸（市售）。
四、實訓內容與步驟
1.葛根藥材中葛根素的含量測定
色譜條件與係統適用性試驗：以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇-水（25∶75）為流動相；檢測波長為250nm。理論板數按葛根素峰計算應不低於4000。
對照品溶液的製備：精密稱取葛根素對照品10mg，置25mL容量瓶中，加30%乙醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置10mL容量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，即得（每1mL中含葛根素80μg)。
供試品溶液的製備：取葛根藥材粉末（過三號篩）0.1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入30%乙醇50mL，稱定質量，加熱回流30min，放冷，再稱定質量，用30%乙醇補足減失的質量，搖勻，過濾，取續濾液，即得。
測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品按幹燥品計算，含葛根素（C21H20O9）不得少於2.4%。
2.葛根芩連丸中葛根素的含量測定
色譜條件與係統適用性試驗：以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水(6∶8∶86)為流動相；檢測波長為250nm。理論板數按葛根素峰計算應不低於3000。
對照品溶液的製備：取葛根素對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1mL含60μg葛根素的溶液，即得。
供試品溶液的製備：取裝量差異項下的本品，研細，取0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定質量，加熱回流1h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，過濾，取續濾液，即得。
測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每1g含葛根以葛根素（C21H20O9）計，不得少於4.5mg。
五、注意事項
注意高效液相色譜儀的規範操作。
六、考核標準
優秀：能熟練使用高效液相色譜儀，操作規範，方法正確，結果準確。
合格：能使用高效液相色譜儀，操作基本規範，方法正確，會計算結果。
不合格：不會使用高效液相色譜儀，操作方法不正確。