一、實訓目標
（1）學會紫外-可見分光光度計的使用方法。
（2）學會分光光度法在中藥製劑定量分析中的應用。
二、實訓原理
益母草口服液為益母草經提取純化製成的口服液，其主要成分為鹽酸水蘇堿，可利用生物堿的雷氏鹽比色法，顯色後采用分光光度法測定該製劑中鹽酸水蘇堿的含量。
雷氏鹽也稱雷氏銨或硫氰化鉻銨NH4［Cr(NH3)2(SCN)4］·H2O，其在酸性介質中可與生物堿類成分定量地生成難溶於水的有色絡合物。生物堿陽離子BH+與雷氏鹽的陰離子［Cr(NH3)2(SCN)4］-結合，生成生物堿雷氏鹽沉澱。
生物堿雷氏鹽沉澱易溶於丙酮，其丙酮溶液所呈現的吸收特征是由分子結構中硫氰化鉻銨部分所產生，而不是結合的生物堿部分，因此，即可以將此沉澱過濾洗淨後溶於丙酮（或甲醇）直接比色測定，換算生物堿的含量；也可精密加入過量雷氏鹽試劑，濾除生成的生物堿雷氏鹽沉澱，用濾液在520～526nm（溶於甲醇時，其λmax=427nm）進行比色測定殘存的過量雷氏鹽含量，間接計算生物堿的含量，本實驗就是采用的這種方法。
三、主要儀器及試藥
儀器：紫外-可見分光光度計、分析天平。
試藥：活性炭、0.1mol/L鹽酸溶液、2%硫氰酸鉻銨溶液、蒸餾水；鹽酸水蘇堿對照品(中國藥品生物製品檢定所)；益母草口服液（市售）。
四、實訓內容與步驟
對照品溶液的製備：取在105℃幹燥至恒重的鹽酸水蘇堿對照品25mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得每1mL含1mg鹽酸水蘇堿的對照品溶液。
標準曲線的製備：精密量取上述對照品溶液2mL、4mL、6mL、8mL，分別置25mL燒杯中，加0.1mol/L鹽酸溶液至10mL，各加活性炭0.5g(140℃幹燥4～5h，備用)，置沸水浴中加熱30s，邊加熱邊攪拌，濾至25mL容量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液10mL分次洗滌燒杯和濾器，洗液並入同一容量瓶中，另取0.1mol/L鹽酸溶液20mL，置另一25mL容量瓶中，作為空白溶液；各精密加入新製的2%硫氰酸鉻銨溶液3mL，搖勻，用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，置冰水浴中放置1h，用幹燥濾紙過濾，取續濾液，以0.1mol/L鹽酸溶液為空白，在520nm波長處分別測定吸光度，用空白試劑的吸光度分別減去對照品溶液的吸光度，以吸光度的差值為縱坐標、濃度為橫坐標，繪製標準曲線。
測定法：精密量取本品10mL，置25mL容量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，用幹燥濾紙過濾，精密量取續濾液10mL，置25mL燒杯中，照“標準曲線的製備”項下的方法自“加活性炭0.5g”起依法測定吸光度，用空白溶液的吸光度減去供試品溶液的吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中相當於鹽酸水蘇堿的含量，計算，即得。
本品每1mL含生物堿以鹽酸水蘇堿(C7H13NO2·HCl)計，不得少於1.0mg。
五、注意事項
（1）活性炭使用前需預先幹燥備用。
（2）本實驗采用的是幹燥濾紙過濾。
（3）本實驗中以空白溶液的吸光度減去待測溶液的吸光度的差值為定量依據，而非待測溶液的吸光度簡單直接計算。
六、考核標準
優秀：能熟練使用紫外-可見分光光度計，操作規範，方法正確，結果準確。
合格：能使用紫外-可見分光光度計，操作基本規範，方法正確，會計算結果。
不合格：不會使用紫外-可見分光光度計，操作方法不正確。