一、種曲質量的測定
種曲中的孢子數、孢子發芽率及所含細菌數是決定種曲質量的關鍵指標。
1.孢子數的測定
①器具及裝置:顯微鏡(接目鏡10~20倍,接物鏡20~40倍,400~800倍),血球計數板,蓋片,1mL吸液管幹熱無菌後使用,刻度最少0.01mL。
②操作:稱取試樣0.5~1g,與100mL殺菌水混合攪拌10~15min,使孢子充分分散,用血球計數板測定孢子數,孢子數在血球計上1個區內以5個左右為宜,過多時須進行稀釋。
通常種曲的孢子數在108~109cfu/mL
③注釋:殺菌水的配製可參考如下:
600mL殺菌水:幹熱滅菌300mL錐形瓶內加生理食鹽水(0.85%食鹽)100mL,加棉塞蒸氣滅菌,為了孢子分散可加幾滴吐溫80。
2.孢子發芽率的測定
①器具及裝置顯微鏡:300~600倍;培養皿:幹熱滅菌;蓋玻片:厚0.1mm左右,10mm×10mm,在培養皿中幹熱滅菌;載玻片;漏鬥:幹熱滅菌,直徑50mm;酒精燈及噴燈;棉塞試管、棉塞滅菌,直徑15mm×長150mm;振蕩器;無菌箱。
②操作
a.試樣的調製:稱取試樣0.5g用殺菌水製成孢子懸浮液,殺菌水中可加入界間活性劑吐溫800.005%~0.01%,用搖床振蕩5~15min,使孢子充分分散,稀釋成(1~5)×104cfu/mL孢子懸浮液。
b.培養:事先幹熱滅菌蓋玻片上塗上厚約1~2mL澄清米曲汁瓊脂培養基層,用殺菌吸管將孢子懸浮液薄薄地流滿培養基麵上,然後將其放在培養皿中載玻片上,於30℃培養5~8h。
c.鏡檢:用300~600倍的顯微鏡檢查發芽的孢子數。每次鏡檢,要在不同視野連續讀取500~1000個孢的發芽情況,求其平均值。直接將孢子懸浮液塗布於培養皿上米曲汁瓊脂培養基上鏡檢時,要觀察5~10個視野,讀取500~1000個左右的孢子數,從發芽孢子總數與全孢子數之比,求得發芽率。
3.一般細菌數的測定
①器具:培養皿,吸管,棉塞試管,分注器,錐形器,量筒,燒杯。
②操作:
a.殺菌生理食鹽水的製備:食鹽8.5g和吐溫802~3滴溶於1L水中,用分注器準確地注入9mL的棉塞試管,集中於鐵絲鋼筐中,每個棉塞用硫酸紙捆紮起來,於高壓滅菌鍋中於進行120℃滅菌10min。另外,準確吸取上述生理食鹽水100mL於300mL錐形瓶,同樣用硫酸紙捆紮住棉塞進行高壓滅菌,備用。
b.肉汁瓊脂培養基的製備:按前述肉汁瓊脂培養基配製法製成後加抗黴劑殺真菌素(Kabicidine)50~500mg/L備用。如不加防黴劑常產生黴菌的菌落影響測定。
c.測定操作:稱取試樣1~10g,放入已裝入100mL殺菌水的300mL錐形瓶中,攪拌10~15min,充分混合,取1mL,在火焰無菌區內加入事前準備好的9mL殺菌水試管中,依次進行稀釋,直至達到指定菌數。倒入幹曲滅菌的培養皿,另將保溫於(50±1)℃的肉汁瓊脂培養基注入培養皿,輕輕地與試樣攪動混合均勻後,靜置固化。這些操作過程均應無菌操作。
培養基固化後將培養皿倒置於恒溫保溫箱內,於30℃培養24~48h,計算試樣中的生菌數。
每支培養皿以得到30~300個菌落為適當的稀釋度。
為了確證無菌操作,用不加試樣的對照操作培養皿即可。
計算:細菌數=A×稀釋倍數試樣采取量(g)式中A——培養皿中平均菌落數
二、醬油曲質量的測定
1.水分
105℃幹燥法。
①器具及裝置:恒溫幹燥器,帶蓋鋁盒,幹燥器,藥物天平。
②操作:稱取試樣50g於鋁盒,於105℃恒溫幹燥器中幹燥6h,幹燥後移入幹燥器中冷卻稱量。
2.浸出液的純度
測定曲浸出液的濁度作為曲中細菌數的尺度。
①器具及裝置:300mL錐形瓶,No.2濾紙,漏鬥,100mL量筒,濁度計。
②試劑:18%食鹽水。
③操作:稱取曲子20g於300mL錐形瓶,加18%食鹽水100mL。時常振蕩浸出30min。用No.2濾紙過濾,用濁度計測定浸出液的濁度。