正文 二、生化試驗培養基和試劑(3 / 3)

(3)試驗方法將瓊脂培養物接種於蛋白腖水內成為稀釋菌液,挑取1環接種於氰化鉀(KCN)培養基。並另挑取1環接種於對照培養基。在(36±1)℃培養1~2d,觀察結果。如細菌生長即為陽性(不抑製),經2d細菌不生長為陰性(抑製)。

注:氰化鉀是劇毒藥物,使用時應小心,切勿沾染,以免中毒,夏天分裝培養基應在冰箱內進行。試驗失敗的主要原因是封口不嚴,氰化鉀逐漸分解,產生氫氰酸氣體逸出,以致藥物濃度降低,細菌生長,因而造成假陽性反應。

16.氧化酶試驗

(1)試劑

①1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液:少量新鮮配製,於冰箱內避光保存。

②1%α-萘酚-乙醇溶液。

(2)試驗方法取白色潔淨濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對苯二胺溶液一滴,陽性者呈現粉紅色,並逐漸加深;再加α-萘酚溶液一滴,陽性者於30s內呈現鮮藍色。陰性於2min內不變色。或以毛細胞吸管吸取試劑,直接滴加於菌落上,其顯色反應與以上相同。

17.過氧化氫酶試驗(觸酶試驗)

(1)試劑3%過氧化氫溶液,臨用時配製。

(2)試驗方法挑取固體培養基上菌落一接種環,置於潔淨試管內,滴加3%過氧化氫溶液2mL,觀察結果。

(3)結果於半分鍾內發生氣泡者為陽性,不發生氣泡者為陰性。

18.三糖鐵瓊脂(TSI)

(1)成分蛋白腖20g,牛肉膏5g,乳糖10g,蔗糖10g,葡萄糖1g,氯化鈉5g,硫酸亞鐵銨[Fe(NH4)(SO4)2·6H2O]0.2g,硫代硫酸鈉0.2g,瓊脂12g,酚紅0.025g,蒸餾水1000mL,pH7.4。

(2)製法將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解於蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5mL,搖勻。分裝試管,裝量宜多些,以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min,放置高層斜麵備用。

19.半固體瓊脂

(1)成分蛋白腖1g,牛肉膏0.3g,氯化鈉0.5g,瓊脂0.35~0.4g,蒸餾水100mL,pH7.4。

(2)製法煮沸溶解各成分,校正pH後分裝小試管,121℃高壓滅菌15min。直立凝固。

20.葡萄糖半固體發酵管

(1)成分蛋白腖1g,牛肉膏0.3g,氯化鈉0.5g,1.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1mL,葡萄糖1g,瓊脂0.3g,蒸餾水1000mL,pH7.4。

(2)製法將蛋白腖、牛肉膏和氯化鈉加入於中,校正pH後加入瓊脂加熱溶解,再加入指示劑和葡萄糖,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min。

21.5%乳糖發酵管

(1)成分蛋白腖0.2g,氯化鈉0.5g,乳糖5g,2%溴麝香草酚藍水溶液1.2mL,蒸餾水1000mL,pH7.4。

(2)製法除乳糖以外的各成分溶解於50mL蒸餾水內,校正pH。將乳糖溶解於另外50mL蒸餾水內,分別於121℃高壓滅菌15min,將兩液混合,以無菌操作分裝於滅菌小試管內。

注:在此培養內,大部分乳糖遲緩發酵的細菌可於1d內發酵。

1.菌落總數測定和大腸菌群檢驗用培養基

(1)營養瓊脂

①成分:蛋白腖10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂15~20g,蒸餾水1000mL,pH7.2~7.4。

②製法:除瓊脂外的成分溶於水中,校正pH,加入瓊脂,121℃高壓滅菌15min。

(2)平板計數瓊脂

①成分:胰蛋白腖5g,酵母浸粉2.5g,葡萄糖1g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,pH7.0。

②製法:除瓊脂外的成分溶於水中,校正pH,加入瓊脂,121℃高壓滅菌15min。

(3)R2A培養基酵母膏0.5g,蛋白腖0.5g,酪蛋白水解物0.5g,葡萄糖0.5g,可溶性澱粉0.5g,丙酮酸鈉0.3g,K2HPO3 0.3g,MgSO4 0.05g,瓊脂12g,蒸餾水1000mL,pH7.2±0.2(25℃)。2~8℃可保存4周。

(4)乳糖膽鹽發酵管

①成分:蛋白腖20g,豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g,乳糖10g,0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,蒸餾水1000mL,pH7.4。

②製法:將蛋白腖、膽鹽及乳糖溶於水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10mL,並放入一個小倒管,115℃高壓滅菌15min。

注:雙料乳糖膽鹽發酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。

(5)乳糖發酵管

①成分:蛋白腖20g,乳糖10g,0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,蒸餾水1000mL,pH7.4。

②製法:將蛋白腖及乳糖溶於水中,校正pH,加入指示劑,每管分裝3mL,並放入一個小倒管,115℃高壓滅菌15min。供大腸菌群證實試驗用。

(6)乳糖蛋白腖培養液(水質檢驗用)

①乳糖蛋白腖培養液:蛋白腖10g,牛肉膏3g,乳糖5g,氯化鈉5g,溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L)1mL,蒸餾水1000mL。

製法:將蛋白腖、牛肉膏、乳糖及氯化鈉溶於蒸餾水中,調整pH為7.2~7.4,再加入1mL 16g/L的溴甲酚紫乙醇溶液,充分混勻,分裝於裝有倒管的試管中,115℃高壓滅菌15min,貯存於冷暗處備用。