正文 二、生化試驗培養基和試劑(2 / 3)

注:容器使用前應用清潔液浸泡,再用清水、蒸餾水衝洗幹淨,並用新棉花做成棉塞,幹熱滅菌後使用。如果操作不注意,有雜質汙染,易造成假陽性結果。

9.馬尿酸鈉培養基

(1)成分馬尿酸鈉1g,肉浸液100mL。

(2)製法將馬尿酸鈉溶解於肉浸液內,分裝於小試管內,並於管壁畫一橫線。以標記管內液麵高度,高壓滅菌121℃,20min。

(3)試劑三氯化鐵(FeCl3·6H2O)12g,溶於2%鹽酸溶液100mL中即成。

(4)試驗方法用純培養物接種,於42℃培養48h,觀察培養液是否到達試管壁上記號處,如不足時,用蒸餾水補足至原量。經離心沉澱,吸取上清液0.8mL,加入三氯化鐵試劑0.2mL,立即混合均勻,經10~15min,觀察結果。

(5)結果出現恒久沉澱物為陽性。

10.營養明膠

(1)成分蛋白腖5g,牛肉膏3g,明膠120g,蒸餾水1000mL,pH6.8~7.0。

(2)製法加熱溶解,校正pH至7.4~7.6,分裝小管,121℃高壓滅菌10min,取出後迅速冷卻,使其凝固。複查最終pH應為6.8~7.0。

(3)試驗方法用瓊脂培養物穿刺接種,放在22~25℃培養,每天觀察結果,記錄液化時間。或放在(36±1)℃培養,每天取出,放冰箱內30min後再觀察結果。

11.苯丙氨酸培養基

(1)成分酵母浸膏3g,DL-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g)2g,磷酸氫二鈉1g,氯化鈉5g,瓊脂12g,蒸餾水1000mL。

(2)製法加熱溶解後分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜麵。

(3)試驗方法自瓊脂斜麵上挑取大量培養物,移種於苯丙氨酸瓊脂,在(36±1)℃培養4h或18~24h,滴加10%三氯化鐵溶液2~3滴,自斜麵培養物上流下,苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。

12.氨基酸脫羧酶試驗培養基

(1)成分蛋白腖5g,酵母浸膏3g,葡萄糖1g,蒸餾水1 000mL,1.6%溴甲酚紫-乙醇溶液1mL,L-氨基酸或DL-氨基酸0.5或1g/100mL,pH6.8。

(2)製法除氨基酸以外的成分加熱溶解後,分裝每瓶100mL,分別加入各種氨基酸:賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸。L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入,再行校正pH至6.8。對照培養基不加氨基酸。分裝於滅菌的小試管內,每管0.5mL,上麵滴加一層液體石蠟,115℃高壓滅菌10min。

(3)試驗方法從瓊脂斜麵上挑取培養物接種,於(36±1)℃培養18~24h,觀察結果。氨基酸脫羧酶陽性者由於產堿,培養基應呈紫色。陰性者無堿性產物,但因葡萄糖產酸而使培養基變為黃色。對照管應為黃色。

13.蛋白腖水(靛基質試驗用)

(1)成分蛋白腖(或胰蛋白腖)20g,氯化鈉5g,牛肉膏3g,蒸餾水1000mL,pH7.4。

(2)製法按上述成分配製,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min。

(3)靛基質試劑

①柯凡克試劑。將5g對二甲氨基甲醛溶解於75mL戊醇中,然後緩慢加入濃鹽酸25mL。

②歐波試劑。將1g對二甲氨基苯甲醛溶解於95mL 95%乙醇內,然後緩慢加入濃鹽酸20mL。

(4)試驗方法挑取小量培養物接種,在(36±1)℃培養1~2d,必要時可培養4~5d。加入柯凡克試劑約0.5mL,輕搖試管,陽性者於試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5mL,沿管壁流下,覆蓋於培養液表麵,陽性者於液麵接觸處呈玫瑰紅色。

蛋白腖中應含有豐富的色氨酸。每批蛋白腖買來後,應先用已知菌種鑒定後方可使用。

14.尿素瓊脂

(1)成分蛋白腖1g,氯化鈉5g,葡萄糖1g,磷酸二氫鉀2g,0.4%酚紅溶液3mL,瓊脂20g,蒸餾水1000mL,20%尿素溶液100mL,pH7.2±0.1。

(2)製法將除尿素和瓊脂以外的成分配好,並校正pH,加入瓊脂,加熱溶化並分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷至50~55℃,加入經除菌過濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2%,最終pH應為7.2±0.1。分裝於滅菌試管內,放成斜麵備用。

(3)試驗方法挑取瓊脂培養物接種,在(36±1)℃培養24d,觀察結果。尿素酶陽性者由於產堿而使培養基變為紅色。

15.氰化鉀(KCN)培養基

(1)成分蛋白腖10g,氯化鈉5g,磷酸二氫鉀0.225g,磷酸氫二鈉5.64g,蒸餾水1000mL,0.5%氰化鉀溶液20mL,pH7.6。

(2)製法將除氰化鉀以外的成分配好後分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min。放在冰箱內使其充分冷卻。每100mL培養基加入0.5%氰化鉀溶液2mL(最後濃度為1∶10000),分裝於12mm×100mm滅菌試管,每管約4mL,立刻用滅菌橡皮塞塞緊,放在4℃冰箱內,至少可保存兩個月。同時,將不加氰化鉀的培養基作為對照培養基,分裝試管備用。