正文 二、生化試驗培養基和試劑(1 / 3)

1.Hugh-Leifson培養基(O/F試驗用)

(1)成分蛋白腖2g,氯化鈉5g,磷酸氫二鉀0.3g,瓊脂4g,葡萄糖10g,0.2%溴麝香草酚藍溶液12mL,蒸餾水1 000mL,pH7.2。

(2)製法將蛋白腖和鹽類加水溶解後,校正pH至7.2。加入葡萄糖、瓊脂煮沸,溶化瓊脂,然後加入指示劑。混勻後,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,直立凝固用。

(3)試驗方法從斜麵上挑取小量培養物作穿刺接種,同時接種兩支培養基,其中一支於接種後滴加融化的1%瓊脂液於表麵,高度約1cm,於(36±1)℃培養。

(4)結果。

2.糖發酵管

(1)成分牛肉膏5g,蛋白腖10g,氯化鈉3g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)2g,0.2%溴麝香草酚藍溶液12mL,蒸餾水1 000mL,pH7.4。

(2)製法

①葡萄糖發酵管按上述成分配好後,按0.5%加入葡萄糖,分裝於有一個倒置小管的小試管內,121℃高壓滅菌15min。

②其他各種糖發酵管可按上述成分配好後,分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min。另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌。將5mL糖溶液加入於100mL培養基內,以無菌操作分裝小試管。

注:蔗糖不純,加熱後會自行水解者,應采用過濾法除菌。

(3)試驗方法從瓊脂斜麵上挑取小量培養物接種,於(36±1)℃培養,一般觀察2~3d。遲緩反應需觀察14~30d。

3.ONPG培養基

(1)成分鄰硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG)(O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)60mg,0.01mol/L磷酸鈉酸緩衝液(pH7.5)10mL,1%蛋白腖水(pH7.5)30mL。

(2)製法將ONPG溶於緩衝液內,加入蛋白腖水,以過濾法除菌,分裝於10mm×75mm試管,每管0.5mL,用橡皮塞塞緊。

(3)試驗方法自瓊脂斜麵上挑取培養物一滿環接種於(36±1)℃培養1~3h和24h觀察結果。如果β-半乳糖苷酶產生,則於1~3h變黃色,如無此酶,則24h不變色。

4.緩衝葡萄糖蛋白腖水(MR和VP試驗用)

(1)成分磷酸氫二鉀5g,多腖7g,葡萄糖5g,蒸餾水1000mL,pH7.0。

(2)製法溶化後校正pH,分裝試管,每管1mL,121℃高壓滅菌15min,

(3)甲基紅(MR)試驗自瓊脂斜麵挑取少量培養物接種本培養基中,於(36±1)℃培養2~4d。哈夫尼亞菌則應在22~25℃培養。滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結果。鮮紅色為陽性,黃色為陰性。

甲基紅試劑配法:10mg甲基紅溶於30mL 95%乙醇中,然後加入20mL蒸餾水。

(4)VP試驗用瓊脂培養物接種本培養基中,於(36±1)℃培養2~4d,哈夫尼亞菌則應在22~25℃培養。加入6% α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL,充分振搖試管,觀察結果。陽性反應立刻或於數分鍾內出現紅色,如為陰性,應放在(36±1)℃培養4h再進行觀察。

5.西蒙氏檸檬酸鹽培養基

(1)成分氯化鈉5g,硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.2g,磷酸二氫銨1g,磷酸氫二鉀1g,檸檬酸鈉5g,瓊脂20g,0.2%溴麝香草酚藍溶液40mL,蒸餾水1000mL,pH6.8。

(2)製法先將鹽類溶解於水內,校正pH,再加瓊脂,加熱融化。然後加入指示劑,混合均勻後分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜麵。

(3)試驗方法挑取少量瓊脂培養物接種,於(36±1)℃培養4d,每天觀察結果。陽性者斜麵上有菌落生長,培養基從綠色轉為藍色。

6.克氏檸檬酸鹽培養基

(1)成分檸檬酸鈉3g,葡萄糖0.2g,酵母浸膏0.5g,單鹽酸半胱氨酸0.1g磷酸二氫鉀1g,氯化鈉5g,0.2%酚紅溶液6mL,瓊脂15g,蒸餾水1000mL。

(2)製法加熱溶解,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜麵。

(3)試驗方法用瓊脂培養物接種整個斜麵,在(36±1)℃培養7d,每天觀察結果。陽性者培養基變為紅色。

7.丙二酸鈉培養基

(1)成分酵母浸膏1g,硫酸銨2g,磷酸氫二鉀0.6g,磷酸二氫鉀0.4g,氯化鈉2g,丙二酸鈉3g,0.2%溴麝香草酚藍溶液12mL,蒸餾水1000mL,pH6.8。

(2)製法先將酵母浸膏和鹽類溶解於水,校正pH後再加入指示劑,分裝試管。121℃高壓滅菌15min。

(3)試驗方法用新鮮的瓊脂培養物接種,於(36±1)℃培養48h,觀察。陽性者由綠色變為藍色。

8.葡萄糖胺培養基

(1)成分氯化鈉5g,硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.2g,磷酸二氫銨1g,磷酸氫二鉀1g,葡萄糖2g,瓊脂20g,蒸餾水1000mL,0.2%溴麝香草酚藍溶液40mL pH6.8。

(2)製法先將鹽類和糖溶解於水內,校正pH,再加瓊脂,加熱融化,然後加入指示劑,混合均勻後分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜麵。

(3)試驗方法用接種針輕輕觸及培養物的表麵,在鹽水管內做成極稀的懸液,肉眼觀察不見渾濁,以每一接種環內含菌數在20~100之間為宜。將接種環滅菌後挑取菌液接種,同時再以同法接種普通斜麵一支作為對照。於(36±1)℃培養24h。陽性者葡萄糖胺斜麵上有正常大小的菌落生長;陰性者不生長,但在對照培養基上生長良好。如在葡萄糖胺斜麵生長極微小的菌落可視為陰性結果。