1.菌落總數測定和大腸菌群檢驗用培養基
(1)營養瓊脂
①成分:蛋白腖10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂15~20g,蒸餾水1000mL,pH7.2~7.4。
②製法:除瓊脂外的成分溶於水中,校正pH,加入瓊脂,121℃高壓滅菌15min。
(2)平板計數瓊脂
①成分:胰蛋白腖5g,酵母浸粉2.5g,葡萄糖1g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,pH7.0。
②製法:除瓊脂外的成分溶於水中,校正pH,加入瓊脂,121℃高壓滅菌15min。
(3)R2A培養基酵母膏0.5g,蛋白腖0.5g,酪蛋白水解物0.5g,葡萄糖0.5g,可溶性澱粉0.5g,丙酮酸鈉0.3g,K2HPO3 0.3g,MgSO4 0.05g,瓊脂12g,蒸餾水1000mL,pH7.2±0.2(25℃)。2~8℃可保存4周。
(4)乳糖膽鹽發酵管
①成分:蛋白腖20g,豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g,乳糖10g,0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,蒸餾水1000mL,pH7.4。
②製法:將蛋白腖、膽鹽及乳糖溶於水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10mL,並放入一個小倒管,115℃高壓滅菌15min。
注:雙料乳糖膽鹽發酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。
(5)乳糖發酵管
①成分:蛋白腖20g,乳糖10g,0.04%溴甲酚紫水溶液25mL,蒸餾水1000mL,pH7.4。
②製法:將蛋白腖及乳糖溶於水中,校正pH,加入指示劑,每管分裝3mL,並放入一個小倒管,115℃高壓滅菌15min。供大腸菌群證實試驗用。
(6)乳糖蛋白腖培養液(水質檢驗用)
①乳糖蛋白腖培養液:蛋白腖10g,牛肉膏3g,乳糖5g,氯化鈉5g,溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L)1mL,蒸餾水1000mL。
製法:將蛋白腖、牛肉膏、乳糖及氯化鈉溶於蒸餾水中,調整pH為7.2~7.4,再加入1mL 16g/L的溴甲酚紫乙醇溶液,充分混勻,分裝於裝有倒管的試管中,115℃高壓滅菌15min,貯存於冷暗處備用。
②二倍濃縮乳糖蛋白腖培養液:按上述乳糖蛋白腖培養液除蒸餾水外,其他成分量加倍。
(7)伊紅美藍瓊脂(EMB)
①成分:蛋白腖10g,乳糖10g,磷酸氫二鉀2g,瓊脂17g,2%伊紅Y溶液20mL,0.65%美藍溶液10mL,蒸餾水1000mL,pH7.1。
②製法:將蛋白腖、磷酸鹽酸和瓊脂溶解於蒸餾水中,校正pH,分裝於燒瓶內,121℃高壓滅菌15min備用。臨用時加入乳糖並加熱溶化瓊脂,冷至50~55℃,加入伊紅和美藍溶液,搖勻,傾注平板。
(8)遠藤氏品紅亞硫酸鈉培養基蛋白腖10g,牛肉膏5g,酵母膏5g,乳糖10g,亞硫酸鈉5g,磷酸氫二鉀3.5g,5%堿性品紅乙醇溶液20mL,瓊脂12g,蒸餾水1000mL,pH7.3,115℃高壓滅菌15min。
(9)LST配方胰蛋白腖20g,乳糖5g,磷酸氫二鉀2.75g,磷酸二氫鉀2.75g,氯化鈉5g,月桂基硫酸鈉0.1g,蒸餾水1000mL。
(10)煌綠膽鹽發酵管(BGLB)配方蛋白腖10g,乳糖5g,牛膽鹽20g,煌綠0.0133g,蒸餾水1000mL,pH7.2。(月桂基硫酸鈉比膽鹽更少抑製大腸杆菌,BGLB可部分抑製發酵乳糖產氣的芽孢菌)。
(11)結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)蛋白腖7.0g,酵母膏3.0g,膽鹽1.5g,中性紅0.03g,乳糖10.0g,結晶紫0.002g,氯化鈉5.0g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,pH7.4。
(12)LST-MUG肉湯胰蛋白()或胰酪腖20.0g,氯化鈉5.0g,乳糖5.0g,磷酸氫二鉀2.75g,磷酸二氫鉀2.75g,月桂基硫酸鈉0.1g,MUG 0.1g,蒸餾水1000mL。將各成分溶於蒸餾水中,分裝試管(內裝倒立小發酵管),每管10mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH為6.8±0.2。
(13)Columbia-MUG瓊脂培養基胰酪腖13.0g,水解蛋白6.0g,酵母浸膏3.0g,牛肉浸膏3.0g,可溶性澱粉1.0g,氯化鈉5.0g,瓊脂13.0g,蒸餾水1000mL。無需調pH。121℃高壓滅菌15min。冷卻至55~60℃,傾注平板。
(14)Xgal-MUG(4-Methyl-Umbelliferyl-β-D-glucuronide)培養基氯化鈉5g,磷酸氫二鉀2.7g,磷酸二氫鉀2g,月桂基磺酸鈉100mg,山梨醇1g,胰腖5g,MUG 50mg,X-β-D-gal 80mg,異丙基-β-D-硫代葡萄糖醛酸100mg,無菌混合後,分10份分裝容器。
(15)MUGal(4-甲基傘形酮-β-半乳糖苷)肉湯胰蛋白腖或胰酪腖20.0g,氯化鈉5.0g,無水磷酸氫二鉀2.75g,無水磷酸二氫鉀2.75g,月桂基硫酸鈉0.1g,MUGal(純度不低於99%)0.08g,蒸餾水1000mL。
將各成分加熱溶於蒸餾水中,以15%~20%氫氧化鈉溶液調整pH,分裝於20mm×150mm試管,每管9mL,115℃蒸汽滅菌10min,最終pH為7.0-7.2。待培養基冷卻後,以無菌操作於每管培養液內加入0.1mL經無菌水稀釋的500μg/mL頭孢磺定液或於1 000mL滅菌培養液內加1mL經無菌水稀釋的5mg/mL頭孢磺啶液並以無菌操作分裝試管。
注:雙料的MUGal肉湯除蒸餾水外其他成分加倍。
2.蛋品沙門菌檢驗用培養基
(1)亞硒酸鹽煌綠增菌液
①成分:蛋白腖5g,酵母浸膏5g,甘露醇5g,牛磺膽酸鈉1g,20%亞硒酸氫鈉溶液20mL,0.25moL/L磷酸鹽緩衝液(pH7.0)100mL,2%煌綠溶液0.25mL,蒸餾水900mL。
②製法:將前麵四種成分溶解於蒸餾水中;校正pH,當用於幹雞蛋白樣品時,pH8.2±0.1;用於其他幹蛋品時,pH7.2±0.1;用於冰蛋品時,pH7.0±0.1;121℃高壓滅菌15min,放冷備用。臨用前加入滅菌的20%亞硒酸氫鈉溶液及磷酸鹽緩衝液,複查混合液的pH,必要時進行校正。加入煌綠溶液定量分裝於滅菌的燒瓶內,每瓶150mL,於1~5d內使用。
注1:20%亞硒氫鈉溶液121℃高壓滅菌15min。
注2:0.25moL/L磷酸鹽緩衝液(pH7.0)配法:磷酸氫二鉀(無水)1.8g,磷酸二氫鉀(無水)17.1g,蒸餾水1000mL,121℃高壓滅菌15min。
(2)煌綠肉湯增菌液
成分:肉浸液肉湯(或牛肉膏湯)1000mL,磷酸氫二鉀1g,2%煌綠溶液0.5~10mL,將肉浸液肉湯加入磷酸氫二鉀(原有磷酸氫二鉀者可不加),校正pH,分裝燒瓶,每瓶100mL,121℃高壓滅菌20min。
2%煌綠水溶液於臨用前配製。按比例於肉湯內加入煌綠溶液,搖勻,備用。
3.沙門菌、誌賀菌、大腸杆菌檢驗用培養基
(1)EC肉湯
①成分:胰蛋白腖20g,3號膽鹽(或混合膽鹽)1.5g,乳糖5g,磷酸氫二鉀4g,磷酸二氫鉀1.5g,氯化鈉5g,蒸餾水1000mL。
②製法:將上述成分混合,溶解後,分裝有發酵倒管的試管中,121℃高壓滅菌15min,最終pH為6.9±0.2。
(2)緩衝蛋白腖水(BP)
①成分:蛋白腖10g,氯化鈉5g,磷酸氫二鈉(Na2PO4·12H2O)9g,磷酸二氫鉀1.5g,蒸餾水1000mL,pH7.2。
②製法:按上述成分配好後以大燒瓶裝,121℃高壓滅菌15min。臨用時無菌分裝每瓶225mL。供沙門菌前增菌用。
(3)氯化鎂孔雀綠增菌液(MM)
①成分:
甲液:胰蛋白腖5g,氯化鈉8g,磷酸二氫鉀1.6g,蒸餾水1000mL。
乙液:氯化鎂(化學純)40g,蒸餾水100mL。
丙液:0.4%孔雀綠水溶液。
②製法:分別按上述成分配好後,121℃高壓滅菌15min備用。臨用時取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL,以無菌操作混合即可。
注:本培養基也稱Rappaport10(R10)增菌液。
(4)四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)
①基礎培養基:多腖或腖5g,膽鹽1g,碳酸鈣10g,硫代硫酸鈉30g,蒸餾水1000mL。
②碘溶液:碘6g,碘化鉀5g,蒸餾水20mL。
③製法:將基礎培養基的各成分加入蒸餾水中,加熱溶解,分裝每瓶100mL。分裝時應隨時振搖,使其中的碳酸鈣混勻。121℃高壓滅菌15min備用。臨用時每100mL基礎培養基中加入碘溶液2mL、0.1%煌綠溶液1mL。
(5)亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)
①成分:蛋白腖5g,乳糖4g,亞硒酸氫鈉4g,磷酸氫二鈉5.5g,磷酸二氫鉀4.5g,L-胱氨酸0.01g,蒸餾水1000mL。
1%L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法:稱取L-半胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1moL/L氫氧化鈉1.5mL,使溶解,再加入蒸餾水8.5mL即成。
②製法:將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解於900mL蒸餾水中,加熱煮沸,放冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解於100mL蒸餾水中,加熱煮沸、俟冷,以無菌操作與上液混合。再加入1%L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1mL。分裝於滅菌瓶中,每瓶100mL,pH應為7.0±0.1。
(6)MKTTn增菌液:
①基礎培養基:牛肉膏4.3g,酪蛋白腖8.6g,氯化鈉2.6g,碳酸鈣38.7g,硫代硫酸鈉30.5g,牛膽鹽4.78g,煌綠0.0096g,新生黴素0.04g,蒸餾水1000mL,pH8.2±0.2。
②碘溶液:碘20g,碘化鉀25g,蒸餾水100mL。
將基礎培養基加熱煮沸5min,冷至45℃時加入20mL碘液,分裝10mL。
(7)RVS增菌液
①溶劑A:大豆腖5.0g,NaCl 8.0g,KH2PO4 1.4g,K2HPO4 0.2g,蒸餾水1000mL。將上述成分溶解於水,如需要可以加熱到70℃左右。
②溶劑B:MgCl2·12H2O 400.0g,水1000mL。
由於氯化鎂容易吸濕,依據相關公式,可取整個的MgCl2·6H2O溶解於新開的容器內。例如,250g MgCl2·6H2O加入625mL的水,得到一個總體積為788mL的溶液,MgCl2·6H2O的重量濃度約為31.7g/100mL。
③溶劑C:將孔雀綠0.4g溶於100mL水中。溶液置於棕色瓶中,室溫保存至少8個月。
④完全培養基:取1000mL溶液A、100mL溶液B、10mL溶液C混合。如需要,調節pH,以便在滅菌後pH為5.2±0.2。使用前,用10mL量分裝試管。置高壓滅菌鍋中115℃滅菌15min。已配好的培養基於(3±2)℃保存。隔天使用該培養基。最終培養基成分是:大豆腖4.5g/L;氯化鈉7.2g/L;磷酸二氫鉀1.26g/L,磷酸氫二鉀0.18g/L;MgCl2 13.4g/L或MgCl2·12H2O 28.6g/L;孔雀綠0.036g/L。
(8)GN增菌液
①成分:胰蛋白腖20g,葡萄糖1g,甘露醇2g,檸檬酸鈉5g,去氧膽酸鈉0.5g,磷酸氫二鉀4g,磷酸二氫鉀1.5g,氯化鈉5g,蒸餾水1000mL,pH7.0
②製法:按上述成分配好,加熱使溶解,校正pH。分裝每瓶225mL,115℃高壓滅菌15min。
(9)誌賀菌增菌液胰蛋白腖20g,磷酸氫二鉀4g,磷酸二氫鉀2g,葡萄糖1g,氯化鈉5g,吐溫80 1.5mL,蒸餾水1000mL,pH7.0,121℃高壓滅菌15min。冷卻後加過濾滅菌的新生黴素,宋內誌賀菌增菌液中添加0.5μg/μL新生黴素,其餘誌賀菌增菌中添加0.3μg/mL新生黴素。
(10)腸道菌增菌肉湯
①成分:蛋白腖10g,葡萄糖5g,牛膽鹽20g,磷酸氫二鈉8g,磷酸二氫鉀2g,煌綠0.015g,蒸餾水1000mL,pH7.2。
②製法:按上述成分配好,加熱使溶解,校正pH。分裝每瓶30mL,115℃高壓滅菌15min。
(11)改良EC新生黴素增菌肉湯胰蛋白腖20g,3號膽鹽1.12g,乳糖5g,磷酸氫二鉀4g,磷酸二氫鉀1.5g,氯化鈉5g,蒸餾水1L,pH 6.9,121℃高壓滅菌15min。冷卻後加過濾滅菌的新生黴素溶液,使最終濃度為20μg/μL。
乳類食品使用含吖啶黃的改良胰酶大豆湯,42℃培養18~24h。配方:胰酶大豆湯17g,3號膽鹽1.5g,磷酸氫二鈉1.25g,酪蛋白水解物10g,蒸餾水1L。121℃高壓滅菌15min。冷卻至50~60℃後加過濾滅菌的鹽酸吖啶黃溶液(5mg/mL),使最終濃度為10μg/mL。