(12)改良胰酶大豆湯(mTSB)脫水胰酶大豆湯30.0g,膽鹽3號1.5g,無水Na2HPO4 1.25g,酪蛋白水解物10.0g,加1000mL蒸餾水。121℃高壓滅菌15min。冷至50~60℃加2mL過濾除菌的鹽酸吖啶黃水溶液(5mg/mL),使其最終濃度為10μg/mL。
(13)XLD平板去氧膽酸鈉2.5g,檸檬酸鐵銨0.8g,硫代硫酸鈉(5H2O)6.8g,酵母膏3g,L-賴氨酸5g,氯化鈉5g,木糖3.75g,乳糖7.5g,蔗糖7.5g,瓊脂13.5g,1%酚紅8mL,蒸餾水1000mL,pH為7.2。
(14)XLT4瓊脂基礎液:酶解蛋白腖1.6g,酵母膏3g,L-賴氨酸5g,木糖3.75g,乳糖7.5g,蔗糖7.5g,檸檬酸鐵銨0.8g,硫代硫酸鈉6.8g,氯化鈉5g,瓊脂18g,酚紅0.08g,蒸餾水1000mL。另加27%的特吉托爾4.6mL,終pH7.4,加熱煮沸溶解不必滅菌。
(15)亞硫酸鉍瓊脂(BS)
①成分:蛋白腖10g,牛肉膏5g,葡萄糖5g,硫酸亞鐵0.3g,磷酸氫二鈉4g,煌綠0.025g,檸檬酸鉍銨2g,亞硫酸鈉6g,瓊脂18~20g,蒸餾水1000mL,pH7.5。
②製法:將前麵5種成分溶解於300mL蒸餾水中。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解。將瓊脂於600mL蒸餾水中煮沸溶解,冷至80℃。將前三液合並,補充蒸餾水至1000mL,校正pH,加0.5%煌綠水溶液5mL,搖勻。冷至50~55℃,傾注平皿。
注:此培養基不需高壓滅菌。製備過程不宜過分加熱,以免降低其選擇性。應在臨用前一天製備,貯存於室溫暗處。超過48h不宜使用。
(16)DHL瓊脂(Deoxycholate hydrogen sulfide lactose agar)
①成分:蛋白腖20g,牛肉膏3g,乳糖10g,蔗糖10g,硫代硫酸鈉2.3g,去氧膽酸鈉1g,中性紅0.03g,檸檬酸鈉1g,檸檬酸鐵銨1g,瓊脂18~20g,蒸餾水1000mL,pH7.3。
②除中性紅和瓊脂外成分溶解於400mL蒸餾水中,調pH。剩餘蒸餾水與瓊脂混合加熱溶解。二液合並加入0.5%中性紅溶液6mL,冷至50~55℃,傾注平皿。
(17)HE瓊脂(Hektoen Enteric Agar)
①成分:腖12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水楊苷2g,膽鹽20g,氯化鈉5g,瓊脂18~20g,蒸餾水1000mL,Andrade指示劑20mL,0.4%溴麝香草酚藍溶液16mL,甲液20mL,乙液20mL,pH7.5。
②製法:將前7種成分溶於400mL蒸餾水,作為基礎液。加入甲液和乙液,調pH。再加入指示劑。剩餘蒸餾水與瓊脂混合加熱溶解。二液合並,冷至50~55℃,傾注平皿。
注:不可高壓滅菌。甲液:硫代硫酸鈉34g,檸檬酸鐵銨4g蒸餾水100mL;乙液:去氧膽酸鈉10g,蒸餾水100mL;Andrade指示劑:酸性複紅0.5g,1mol/L氫氧化鈉16mL,蒸餾水100mL。將複紅溶於蒸餾水中,加入氫氧化鈉溶液。數小時後如果不褪色,再加氫氧化鈉溶液1~2mL,至褪色。
(18)SS瓊脂
①基礎培養基:牛肉膏5g,腖5g,三號膽鹽3.5g,瓊脂17g,蒸餾水1000mL。
將牛肉膏、腖和膽鹽溶解於400mL蒸餾水中,將瓊脂加入於600mL蒸餾水中,煮沸使其溶解,再將兩液於121℃高壓滅菌15min,保存備用。
②完全培養基:基礎培養基1000mL,乳糖10g,硫代硫酸鈉8.5g,檸檬酸鈉8.5g,10%檸檬酸鐵溶液10mL,1%中性紅溶液2.5mL,0.1%煌綠溶液0.33mL,加熱溶化基礎培養基,按比例加入上述除染料以外之各成分,充分混合均勻,校正pH7.0,加入中性紅和煌綠溶液,傾注平板。
注1:製好的培養基宜當日使用,或保存於冰箱內於48h內使用。
注2:煌綠溶液配好後應在10d以內使用。
注3:可以購用SS瓊脂的幹燥培養基。
(19)WS瓊脂
①成分:腖12g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,乳糖12g,蔗糖12g,十二烷基硫酸鈉2g,瓊脂15g,Andrade指示劑20mL,0.4%溴麝香草酚藍溶液16mL,甲液20mL,蒸餾水1000mL,pH7.0。
②製法:除指示劑和甲液外,將其他成分加熱溶解,無需消毒,校正pH後加入提示劑和甲液,傾注平板應呈草綠色。
注1:供沙門菌分離用。
注2:Andrade指示劑和甲液的配製均見HE瓊脂。
(20)麥康凱瓊脂
①成分:蛋白腖17g,腖3g,豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g,氯化鈉5g,瓊脂17g,蒸餾水1000mL,乳糖10g,0.01%結晶紫水溶液10mL,0.5%中性紅溶液5mL。
②製法:將蛋白腖、腖、膽鹽和氯化鈉溶解於400mL蒸餾水中,校正pH7.2。將瓊脂加入600mL蒸餾水中,加熱溶解。將二液合並,分裝於燒瓶內,121℃高壓滅菌15min備用。
臨用時加熱溶化瓊脂,趁熱加入乳糖,冷至50~55℃時,加入結晶紫和中性紅水溶液,搖勻後傾注平板。
注:結晶紫及中性紅水溶液配好後需經高壓滅菌。
(21)山梨醇麥康凱平板(SMAC)蛋白腖17g,多腖3g,山梨醇10g,膽鹽5g,氯化鈉5g,0.01%結晶紫10mL,0.5%中性紅5mL,1%亞碲酸鉀溶液(最終量為2.5g)瓊脂17g,蒸餾水1000mL,pH7.2。
將蛋白腖、多腖、膽鹽、氯化鈉溶於400mL水中,校正pH7.2。瓊脂與600mL蒸餾水加熱溶化後,二液合並,121℃高壓滅菌15min。冷至100℃左右時加入山梨醇。50~55℃時加入結晶紫和中性紅,再加入滅菌過濾的亞碲酸鉀溶液,使亞碲酸鉀的最終濃度為2.5mg/L,並加入頭孢克肟使終濃度為0.05mg/L。
(22)CT-SMAC培養基蛋白腖20g,山梨醇10g,去氧膽酸鈉1g,氯化鈉5g,0.1%結晶紫1mL,1%中性紅3mL,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,pH7.2。滅菌冷至50℃時加入1mL頭孢克肟-亞碲酸鉀溶液,使頭孢克肟的最終濃度為0.05mg/L(抑製變形杆菌),亞碲酸鉀的最終濃度為2.5mg/L(抑製氣單胞菌等)。此培養基在密封塑料袋中可保留一周。
(23)TBX瓊脂蛋白腖20.0g,3號膽鹽1.5g,X-β-D-葡萄糖醛酸苷(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷)0.075g,瓊脂15.0g,蒸餾水1000mL,pH為7.2±0.2(25°C)。121°C高壓滅菌15min。
4.副溶血性弧菌檢驗用培養基
(1)氯化鈉結晶紫增菌液
①成分:蛋白腖20g,氯化鈉40g,0.01%結晶紫溶液5mL,蒸餾水1000mL,pH9.0。
②製法:除結晶紫外,其他按上述成分配好,加熱溶解。約加30%氫氧化鉀溶液4.5mL校正pH。加熱煮沸,過濾,再加入結晶紫溶液混合後分裝試管。121℃高壓滅菌15min。
(2)堿性蛋白腖水蛋白腖20g,氯化鈉5g,蒸餾水1000mL,pH8.4~8.6。氯化鈉多黏菌素B肉湯配方:A液:蛋白腖10g,酵母膏3g,氯化鈉20g,蒸餾水1000mL,pH7.4。B液:多黏菌素B硫酸鹽100000U溶於100mL蒸餾水。隨用隨配:A液90mL加B液10mL。
(3)GST肉湯蛋白腖10g,肉膏3g,氯化鈉30g,葡萄糖5g,甲基紫0.002g,月桂基磺酸鈉1.36g,蒸餾水1000mL,pH8.6,121℃高壓滅菌15min。
(4)氯化鈉蔗糖瓊脂
①成分:蛋白腖10g,牛肉膏10g,氯化鈉50g,蔗糖10g,瓊脂18g,0.2%溴麝香草酚藍溶液20mL,蒸餾水1000mL,pH7.8。
②製法:將牛肉膏、蛋白腖及氯化鈉溶解於蒸餾水中,校正pH。加入瓊脂,加熱溶解,過濾。加入指示劑,分裝燒瓶100mL。121℃高壓滅菌15min備用。臨用前在100mL培養基內加入蔗糖1g,加熱溶化並冷到50℃,傾注平板。
(5)嗜鹽菌選擇性瓊脂
①成分:蛋白腖20g,氯化鈉40g,瓊脂17g,0.01%結晶紫溶液5mL,蒸餾水1000mL,pH7.8。
②製法:除結晶紫和瓊脂外,其他按上述成分配好,校正pH。加入瓊脂,加熱溶解,再加入結晶紫溶液,每瓶分裝100mL。
(6)TCBS瓊脂酵母膏10g,牛膽鹽8g,檸檬酸鐵1g,蛋白腖10g,硫代硫酸鈉10g,蔗糖20g,瓊脂15g,溴麝香草酚藍0.04g,麝香草酚藍0.04g,pH8.6。TCBS可作為計數平板(0.1mL塗抹)。37℃培養18h。
(7)TSAT瓊脂胰大豆腖瓊脂40g,蔗糖20g,氯化鈉25g,3號膽鹽0.5g,3mL 1%TTC溶液,蒸餾水1000mL,pH為7.1,121℃高壓滅菌15min。
(8)氯化鈉營養瓊脂蛋白腖5g,肉膏3g,氯化鈉30g,瓊脂8~18g,蒸餾水1000mL,pH8.5。121℃高壓滅菌15min。
(9)氯化鈉肉膏酵母膏瓊脂蛋白腖10g,肉膏2g,酵母膏6g,氯化鈉30g,鹽酸半胱氨酸0.3g,葡萄糖2g,瓊脂5~8g,蒸餾水1000mL,pH7.5,每管分裝4mL,121℃高壓滅菌15min。
(10)我妻氏培養基蛋白腖10g,酵母浸粉5g,氯化鈉70g,甘露醇5g,瓊脂15g,0.1%結晶紫溶液1mL,蒸餾水1000mL。pH7.5。結晶紫外加熱溶解,調節pH後再加入。115℃滅菌15min。冷至50℃線加入新鮮的20%濃度的洗滌過的人紅血球或馬紅血球,混勻後傾注平板。
(11)氯化鈉血瓊脂
①成分:酵母膏3g,蛋白腖10g,氯化鈉70g,磷酸氫二鈉5g,甘露醇10g。結晶紫0.001g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL。
②製法:調pH8.0加熱30min(不必高壓),待冷至45℃左右時,加入新鮮人或兔血(5%~10%)混合均勻,傾注平皿。可替代我妻氏平板。
(12)3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂
①成分:三糖鐵瓊脂1000mL,氯化鈉30g。
②製法:先配製三糖鐵瓊脂,再加入氯化鈉30g,分裝試管,121℃高壓滅菌15min。放置高層斜麵備用。
(13)嗜鹽性試驗培養基
①成分:蛋白腖10g,氯化鈉按不同量加蒸餾水100mL,pH7.7。
②製法:配製2%蛋白腖水,校正pH,共配製5瓶,每瓶100mL。每瓶分別加入不同量的氯化鈉:a.不加;b.3g;c.7g;d.9g;e.11g。待溶解後分裝試管。121℃高壓滅菌15min。
(14)3.5%氯化鈉生化試驗培養基成分及製法:根據所需糖的種類按前法配製。隻是將氯化鈉含量改為3.5%,pH7.7。
5.金黃色葡萄球菌和鏈球菌檢驗用培養基
(1)肉浸液肉湯
①成分:絞碎牛肉500g,氯化鈉5g,蛋白腖10g,磷酸氫二鉀2g,蒸餾水1000mL。
②製法:將絞碎之去筋膜無油脂牛肉500g加蒸餾水1000mL,混合後放冰箱過夜,除去液麵之浮油,隔水煮沸0.5h,使肉渣完全凝結成塊,用絨布過濾,並擠壓收集全部濾液,加水補足原量。加入蛋白腖、氯化鈉和磷酸鹽,溶解後校正pH7.4~7.6煮沸並過濾分裝,121℃高壓滅菌30min。
(2)血瓊脂
①成分:豆粉瓊脂(pH7.4~7.6)100mL,脫纖維羊血(或免血)5~10mL。
②製法:加熱溶化瓊脂,冷卻到50℃。以滅菌操作加入脫纖維羊血,搖勻,傾注平板。亦可分裝滅菌試管,置成斜麵。也可用其他營養豐富的基礎培養基配製血瓊脂。
(3)胰酪腖大豆肉湯
①成分:胰酪腖(或胰蛋白腖)17g,植物蛋白腖(或大豆蛋白腖)3g,氯化鈉100g,磷酸氫二鉀2.5g,葡萄糖2.5g,蒸餾水1000mL。
②製法:將上述成分混合,加熱並輕輕攪拌溶解,分裝後,121℃高壓滅菌15min,最終pH為7.3±0.2。
(4)Baird-Parker培養基
①成分:胰蛋白腖10g,牛肉膏5g,酵母膏1g,丙酮酸鈉10g,甘氨酸12g,氯化鋰(LiCl·6H2O)5g,瓊脂20g,蒸餾水950mL。