②增菌劑的配法:30%卵黃鹽水50mL與除菌過濾的1%亞碲酸鉀溶液10mL混合,保存於冰箱內。
③製法:將各成分加到蒸餾水中,加熱煮沸至完全溶解。冷到25℃,校正pH。分裝每瓶95mL,121℃高壓滅菌15min。臨用時加熱融化瓊脂,冷至50℃,每95mL加入預熱至50℃的卵黃亞碲酸鉀增菌劑5mL搖勻後傾注平板。培養基應是致密不透明的。使用前在冰箱儲存不得超過48h。
(5)7.5%氯化鈉肉湯
①成分:蛋白腖10g,牛肉膏3g,氯化鈉75g,蒸餾水1000mL,pH7.4。
②製法:將上述成分加熱溶解,校正pH,分裝試管,121℃高壓滅菌15min。
(6)匹克氏肉湯
①成分:含1%胰蛋白腖的牛心浸液200mL,1∶25 000結晶紫鹽水溶液10mL,1∶800三氮化鈉溶液10mL,脫纖維兔血(或羊血)10mL。
②製法:將上述已滅菌的各種成分,以無菌操作依次混合,分裝於滅菌試管內,每管內約2mL,保存於冰箱內備用。
3.8%檸檬酸鈉溶液
成分:檸檬酸鈉3.8mL,蒸餾水100mL。
製法:取檸檬酸鈉3.8g,加蒸餾水到100mL,溶解後過濾,裝瓶,121℃高壓滅菌15min。
(7)兔(人)血漿製備取3.8%檸檬酸鈉溶液一份加兔(人)全血四份,混好靜置之,則血球下降,即可得血漿進行試驗。
(8)葡萄糖肉湯(含8%新生牛血清)
①成分:酵母浸膏3g,10%葡萄糖溶液20mL,檸檬酸鈉3g,磷酸氫二鉀2g,牛肉湯900mL,24.7%硫酸鎂20mL,0.5%對氨基苯甲酸5mL,新生牛血清80mL。
②製法:除葡萄糖及硫酸鎂外,其他各物混合,加熱溶解,矯正pH至7.6,再煮沸5min;用濾紙過濾並分裝於100mL三角燒瓶內,每瓶50mL,包紮瓶口,121℃高壓滅菌20min;將葡萄糖配成10%水溶液,硫酸鎂配成24.7%水溶液,分別於115℃高壓滅菌15min;每50mL無菌肉湯內加入無菌葡萄糖及磷酸鎂水溶液各1mL,混勻。於37℃培養2d證明無細菌生長後存於冰箱內備用。此培養基用於豬鏈球菌的培養。
6.產芽孢菌檢驗用培養基(蠟樣芽孢杆菌、肉毒杆菌、產氣莢膜梭菌)
(1)甘露醇卵黃多黏菌素瓊脂
①成分:蛋白腖10g,牛肉膏1g,甘露醇10g,瓊脂15g,氯化鈉10g,蒸餾水1000mL,0.2%酚紅溶液13mL,多黏菌素B100IU/mL,pH7.4。
②製法:將前麵5種成分加入蒸餾水中,加熱溶解,校正pH,加入酚紅溶液。分裝燒瓶,每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min。臨用時加熱融化瓊脂,冷至50℃,每瓶加入50%卵黃液5mL及多黏菌素B10000IU,混勻後傾注平板。
(2)酪蛋白瓊脂
①成分:酪蛋白10g,牛肉膏3g,磷酸氫二鈉2g,氯化鈉5g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,0.4%溴麝香草酚藍溶液12.5mL,pH7.4。
②製法:將除指示劑外的各成分混合,加熱溶解(但酪蛋白不溶解),校正pH。加入指示劑,分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min,臨用時加熱融化瓊脂,冷至50℃,傾注平板。
注:將菌株劃線接種於平板上,如沿菌落周圍有透明圈形成,即為能水解酪蛋白。
(3)木糖-明膠培養基
①成分:胰腖10g,酵母膏10g,木糖10g,磷酸氫二鈉5g,明膠120g,蒸餾水1000mL,0.2%酚紅溶液25mL,pH7.6。
②製法:將除酚紅以外的各成分混合,加熱溶解,校正pH。加入酚紅溶液,分裝試管,121℃高壓滅菌15min,迅速冷卻。
(4)庖肉培養基
①成分:牛肉浸液1000mL,蛋白腖30g,酵母膏5g,磷酸氫二鈉5g,葡萄糖3g,可溶性澱粉2g,碎肉渣適量,pH7.8。
②製法:稱取新鮮除脂肪和筋膜的碎牛肉500g,加蒸餾水1000mL和1moL/L氫氧化鈉溶液25mL,攪拌煮沸15min,充分冷卻,除去表層脂肪,澄清,過濾,加水補足至1000mL。加入除碎肉渣外的各種成分,校正pH。
碎肉渣經水洗後晾至半幹,分裝15mm×150mm試管,每支約2~3cm高,每管加入還原鐵粉或少量鐵屑。將上述液體培養基分裝至每管內,超過肉渣表麵約1cm,上麵覆蓋熔化的凡士林或液體石蠟0.3~0.4cm。121℃高壓滅菌15min。
(5)還原亞硫酸鹽的梭菌計數用瓊脂蛋白腖15g,大豆腖7.5g,酵母膏7.5g,肉膏7.5g,檸檬酸鐵銨1g,焦亞硫酸鈉1g,L-半胱氨酸0.75g,瓊脂30g,蒸餾水1000mL,pH7.6。
(6)卵黃CW瓊脂腖(Difco)10g,肉浸膏5g,酪蛋白腖10g,氯化鈉5g,乳糖10g,酚紅0.05g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,pH7.6。滅菌後按10%比例加入50%的卵黃液。未經加熱處理食品加入0.02g硫酸卡那黴素。
(7)乳糖卵黃牛乳瓊脂
①A基礎:營養肉湯800mL,瓊脂12g,乳糖9.6g,中性紅(1%)2.6mL,高壓滅菌。
②B:50%卵黃生理鹽水稀釋液。
③取A基礎液80mL+3mL卵黃液+12mL滅菌脫脂牛乳。
(8)焦亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂(SC)
①A基礎:胰腖15g,大豆腖5g,酵母膏5g,無水NaS2O5 1g,檸檬酸鐵銨(Ⅲ)1g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,pH7.6。
②B:4%環絲氨酸水溶液。
③配製:A基礎100mL+1mL環絲氨酸溶液。
(9)乳糖焦亞硫酸鹽培養基(LS)
①基礎:酶解酪腖5g,酵母膏2.5g,氯化鈉2.5g,乳糖10g,L-半胱氨酸0.3g,蒸餾水1000mL,pH7.1。
②分裝8mL於帶有倒管的試管中,121℃高壓滅菌15min。
用1.2g焦亞硫酸鈉溶於100mL蒸餾水中過濾除菌。另取1g檸檬酸三鐵銨溶於100mL蒸餾水中過濾除菌。各取0.5mL無菌加入到上述試管中。
(10)卵黃瓊脂培養基
①成分:基礎培養基:肉浸液1000mL,蛋白腖15g,氧化鈉5g,瓊脂25~30g,pH7.5;50%葡萄糖水溶液;50%卵黃鹽水懸液。
②製法:製備基礎培養基,分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min。臨用時加熱融化瓊脂,冷至50℃,每瓶內加入50%葡萄糖水溶液2mL和50%卵黃鹽水懸液10~15mL,搖勻,傾注平板。
(11)DS培養基蛋白腖15g,酵母膏4g,可溶性澱粉4g,硫乙醇酸鈉1g,Na2HPO3·12H2O 10g,蒸餾水1000mL,pH7.5。121℃高壓滅菌15min。使用前煮沸驅氧。流水冷卻後接種。
(12)亞硫酸鹽-多黏菌素-碘胺嘧啶瓊脂(SPS)
①成分:胰酶消化酪蛋白腖15g,酵母膏10g,檸檬酸鐵銨0.7~1.0g,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,10%亞硫酸鈉水溶液(新配)5mL,0.12%多黏菌素B硫酸鹽水溶液10mL,1.2%磺胺嘧啶鈉水溶液10mL。
②製法:前麵5種成分配合後加熱溶解,校正pH分裝每瓶1000mL,121℃高壓滅菌15min。臨用時加熱溶化瓊脂,冷至50℃。按比例加入後3種溶液,搖勻,傾注平板。
(13)液體硫乙醇酸鹽培養基(FT)
①成分:胰酶消化酪蛋白腖15g,L-胱氨酸0.5g,葡萄糖5g,酵母膏5g,氯化鈉2.5g,硫乙醇酸鈉0.5g,刃天青(Resazurin)0.001g,瓊脂0.75g,蒸餾水1000mL,pH7.1。
②製法:煮沸溶解,冷即後校正pH,分裝試管,每管10mL,121℃高壓滅菌15min。臨用前隔水煮沸10min,以驅除培養基中溶解的氧氣,迅速冷卻。
(14)含鐵牛乳培養基
成分:新鮮全脂牛乳1000mL,硫酸亞鐵1g,蒸餾水50mL。
製法:將硫酸亞鐵溶解於蒸餾水中,不斷攪拌,緩慢地加入於1000mL牛乳中,混勻。分裝試管,每管10mL,121℃高壓滅菌15min。本培養基必須新鮮製備。
(15)動力-硝酸鹽培養基
(A法)
①成分:蛋白腖5g,牛肉膏3g,硝酸鉀1g,瓊脂3g,蒸餾水1000mL,pH7.0。
②製法:加熱溶解,校正pH。分裝試管,每管10mL,121℃高壓滅菌15min。
(B法)
①成分:蛋白腖5g,牛肉膏3g,硝酸鉀5g,磷酸氫二鉀2.5g,半乳糖5g,甘油5g,瓊脂3g,蒸餾水1000mL,pH7.4。
②製法:將以上各成分混合,加熱溶解,校正pH。分裝試管,121℃高壓滅菌15min。
7.罐頭檢驗用培養基
(1)平酸菌瓊脂胰腖10g,葡萄糖5g,溴甲酚紫(2%酒精溶液)2mL,瓊脂15g,蒸餾水1000mL,pH6.7。
(2)K培養基蛋白腖5g,酵母膏3g,胰腖10g,L-鹽酸鳥氨酸5g,甘露醇1g,肌醇10g,硫乙醇酸鈉0.4g,檸檬酸鐵銨0.5g,溴甲酚紫0.02g,瓊脂30g,蒸餾水1000mL,pH為3.7。121℃,12min滅菌。
(3)嗜熱解糖梭菌培養基蛋白腖20g,酵母膏3g,1%溴甲酚紫乙醇溶液4mL,可溶性澱粉2g,蒸餾水1L。55℃厭氧培養2~3d。
(4)脫硫腸狀菌培養基蛋白腖10g,亞硫酸鈉1g,檸檬酸鐵0.5g,蒸餾水1L。
(5)溴甲酚紫葡萄糖肉湯
①成分:蛋白腖10g,牛肉浸膏3g,葡萄糖10g,氯化鈉5g,溴甲酚紫0.04g(或1.6%酒精溶液2mL),蒸餾水1000mL。
②製法:將上述各成分(溴甲酚紫除外)加熱攪拌溶解,調至pH7.0±0.2,加入溴甲酚紫,分裝於帶有小倒置管的中號試管中,每管10mL,121℃滅菌15min。
(6)酸性肉湯
①成分:多腖5g,酵母浸膏5g,葡萄糖5g,磷酸氫二鉀4g,蒸餾水1000mL。
②製法:將以上各成分加熱攪拌溶解,調至pH7.0±0.2,121℃滅菌15min,勿過分加熱。
(7)麥芽浸膏湯
①成分:麥芽浸膏15g,蒸餾水1000mL。
②製法:將麥芽浸膏在蒸餾水中充分溶解,濾紙過濾,調至pH4.7±0.2,分裝,121℃高壓滅菌15min。
如無麥芽浸膏,可下法製備:用飽滿分裝大麥粒在溫水浸透,置溫暖處發芽,幼芽長達到2cm時,瀝幹餘水,幹透,磨細使成麥芽粉。製備培養基時,取麥芽粉30g加水300mL、混勻,在60~70℃浸漬1h,吸出上層水。再同樣加水浸漬一次,取上層水,合並兩次上層水,並補加水至1000mL,濾紙過濾。調至pH4.7±0.2,分裝,121℃高壓滅菌15min。
(8)錳鹽營養瓊脂先配製營養瓊脂,每1000mL加入硫酸錳水溶液1mL(100mL蒸餾水溶解3.08g硫酸錳)。觀察芽孢形成情況,最長不超過10d。
8.黴菌和酵母菌計數用培養基
(1)察氏培養基
①成分:硝酸鈉3g,磷酸氫二鉀1g,硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g,氯化鉀0.5g,硫酸亞鐵0.01g,蔗糖30g,瓊脂20g,蒸餾水1000mL。
②製法:加熱溶解,分裝後121℃滅菌20min。
③用途:青黴、曲黴鑒定及保存菌種用。
(2)孟加拉紅培養基
①成分:蛋白腖5g,葡萄糖10g,磷酸二氫鉀1g,硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.5g,瓊脂20g,1/3000孟加拉紅溶液100mL,蒸餾水1000mL,氯黴素0.1g。
②製法:上述各成分加入蒸餾水中溶解後,再加孟加拉紅溶液。另用少量乙醇溶解氯黴素加入培養基中,分裝,121℃滅菌20min。
(3)馬鈴薯葡萄糖瓊脂馬鈴薯(去皮切塊)300g,葡萄糖20g,瓊脂酌量添加,蒸餾水1000mL。將馬鈴薯去皮切塊,加蒸餾水1000mL,煮沸20~30min,紗布過濾,補水至1000mL。加入其他成分,115℃高壓滅菌15min。
(4)CYA(察氏酵母膏瓊脂)磷酸氫二鉀1g,察氏鹽液10mL,酵母膏粉5g,蔗糖30g,瓊脂15g,水1000mL。
察氏鹽液:硝酸鈉30g,氯化鉀5g,硫酸鎂(7H2O)5g,硫酸亞鐵(7H2O)0.1g,水100mL。
(5)MEA(肉汁瓊脂)肉膏粉20g,蛋白腖1g,葡萄糖20g,瓊脂20g,蒸餾水1000mL。