(1)固體斜麵培養 培養基為麥芽汁瓊脂,培養溫度2830℃,時間5d。
(2)液體試管(10mL)培養 培養基為10°Bx麥芽汁,培養溫度2830℃,時間24h。
(3)三角瓶(100mL)培養 培養基1/3麥芽汁和2/3 12°Bx稀糖液,培養溫度28~30℃,時間24h。
(4)卡氏罐或大三角瓶(5L)培養 培養基為12°Bx稀糖液,培養溫度28~30℃,時間16~18h。
(5)第一純粹培養罐(50L)培養 培養基12°Bx稀糖液,溫度28~30℃,時間10~12h,糖度降50%。
(6)第二純粹培養罐(500L)培養 培養基為12°Bx稀糖液,培養溫度2830℃,時間10~12h。
2.純粹培養罐的操作方法:
(二)糖蜜酒精酵母車間培養方法
糖蜜酒精酵母車間培養分為間歇式酒母培養、半連續式酒母培養、連續式酒母培養三種方法。
1.間歇式酒母培養
間歇式酒母培養在糖蜜酒母罐中進行。
(1)操作要點 ①酒母罐洗滌幹淨;②用蒸汽空罐滅菌100℃,時間1h;③加入酒母稀糖液,體積分數12%~14%,酸度6~7度;④接入10%~20%純粹培養罐的酒母種子;⑤通風保溫培養,通風量為2~3m3/(m3·h),溫度28~29℃,培養10h左右,一般當糖度降到原有的65%~50%時,即為成熟。所有工廠都采用留種法,即將成熟酒母的10%~20%留在罐內,作為下一批種子。
(2)糖蜜酒母成熟醪的主要指標 酵母細胞數1.2~1.5億個/mL,酸度不增加維持在67度,濃度6%~7%,酒精含量3%~3.5%(體積分數)。
2.半連續式酒母培養
(1)培養特點 酒母在第一和第二純培養罐中采用間歇培養,進入酒母罐後則采用半連續培養。酒母用的稀糖液連續流入酒母罐,成熟的酒母自罐底定時送至發酵罐。
(2)操作要點
①第一純培養罐:接種前對已清洗幹淨的純培養罐通入蒸汽,保溫100℃,滅菌10min;然後加入約12°Bx的稀糖液,再用蒸汽煮沸10min;冷卻後加硫酸銨0.3%,粗磷酸0.1%,調pH3.8~4.2;接入卡氏罐酵母菌種,保溫30~32℃,采用約10min/h的間歇通風,風量控製與間歇培養相同。培養時間10~12h,糖度降為原來的50%,酵母細胞數達1.0~1.2億個/mL,即為成熟。
②第二純培養罐 培養操作和酵母成熟醪的指標與第一純培養罐基本相同,不同點是第二純培養罐的體積是第一純培養罐的10倍左右。
③酒母罐培養 酒母罐的體積是第二純培養罐的10倍。酒母罐的培養條件與純培養罐基本相同,隻是每隔8h左右需向發酵罐送一次成熟酒母,酒母罐中每次保留1/10成熟酒母,再連續加入稀糖液,並通入無菌空氣,待8h後再向發酵罐送一次成熟酒母。如此重複循環,一般隔5~7d才將酒母罐放盡,清洗滅菌一次,再進行下批培養。
3.連續式酒母培養
酒母連續培養是將稀糖液連續不斷進入酒母罐,而成熟酒母醪不斷地自酒母罐流出,進入發酵罐組的首罐或酒母增殖罐。在連續培養過程中,要注意保持酒母罐中細胞數量恒定,同時要保證酵母生長的最適條件,控製好糖液濃度、酸度、通風量等。
連續培養時,一般將三個酒母罐的排出管連接。
(1)操作要點 ①先按間歇培養法在第1罐內培養一罐成熟酒母;然後通過管道放一半酵母醪進入第二罐,加稀糖液,同時充滿第一和第二罐,保溫通風培養至成熟。②從第一和第二罐各放1/3成熟酵母醪進入第三罐,然後加稀糖液,同時將三隻罐都充滿。③培養至成熟後,以一定流量連續地同時將稀糖液加到三隻罐中去,同時從罐組底部不斷地放出相同數量的成熟酵母醪進入發酵罐。
三隻罐的總容積為每天發酵醪量的12%~15%。每隔5~7d各罐輪流放空,清洗滅菌一次,連續培養時通風量為2~3m3/(m3·h)。
(2)工藝條件 連續培養用稀糖液的體積分數為12%~14%,酸度為6~7度,培養溫度28~29℃,糖的消耗率約為55%左右,成熟酒母含酒精3%~4%(體積分數)。酵母細胞數(1.5~1.8)億個/mL。