周瑜一見蔣幹，就先攻其不備，直呼為說客，弄得蔣幹慌裏慌張，連連否認，假意說：“好久不見老朋友了。特地來看望你，怎麼疑心我是說客呢？”周瑜笑道：“我雖然不算聰明，可這點事還看得出來。”蔣幹越發難堪，但又不能改口，被周瑜激住了，隻得假裝要回去。周瑜便趁勢道歉，挽住蔣幹，熱情地留下了他。這樣，周瑜首先將住了蔣幹，讓蔣幹欲退不能，欲進不得，但又邀功心切，就好一步步地實行計策了。
周瑜為了表示不疑蔣幹，就裝出一副率直的樣子，把文武百官召來，一個個介紹給蔣幹，並特設酒宴，以示歡迎。周瑜讓蔣幹坐了首位，大聲對眾將說：“子翼是我同窗好友，雖然從江北過來，卻不是曹操的說客，你們不必驚疑。今天的宴會，隻敘朋友交情，不可談論軍事，違令者斬！”說畢將佩劍交給太史慈，讓他監酒。然後，自己先痛飲起來，一邊飲一邊勸說眾人，並說自己平時並不飲酒，隻是見了故人，這才開懷暢飲，周瑜的豪放和率性。弄得蔣幹驚疑不定。
喝到半醉，周瑜拉著蔣幹的手，走出帳外，看到兩邊侍立的武士，周瑜說：“我的軍士還算不錯吧？”蔣幹忙說：“真象虎豹一樣。”周瑜又把蔣幹領到帳後糧草處，見糧草堆積如山，又問：“我的糧草不算少吧？”蔣幹忙說：“兵精糧足，果然名不虛傳！”周瑜這一副推心置腹的樣子，果然使蔣幹不再疑心周瑜有詐。然後，周瑜縱聲大笑說：“大丈夫活在世上，遇到知心主公，言聽計從，禍福與共。即使有蘇秦、張儀那樣的利嘴，又怎能說動我的心呢？”說罷大笑。周瑜的這番話，使蔣幹絕了做說客的心，也更不懷疑周瑜用計了。
又回去喝了一陣酒，周瑜堅持讓蔣幹和他同榻而眠，以敘舊情，但一睡到床上，周瑜便鼻息如雷，蔣幹可是輾轉反側，難以入睡。三更時分，蔣幹起床。見案頭堆著一大疊文件，隨手翻看，原來俱是來往信件，其中有一封上寫著“蔡瑁、張允謹封”字樣，蔣幹大驚，連忙抽看，原來是曹軍水軍都督蔡瑁、張允寫給周瑜的信，信中說一旦練好水軍，便伺機割了操頭來見。蔣幹看後，一麵大驚，一麵大喜，驚的是二人居然反叛，喜的是自己撞破了這一秘密，可立大功。正在這時，周瑜睡夢之中唔唔而言道：“子翼，隔幾天我叫你看曹賊之頭！……”四更時分，帳外有人進來小聲喚醒周瑜，周瑜迷迷糊糊地問道：“是誰睡在我的床上？”那人說：“是都督自己請蔣先生同睡，怎麼忘了？”周瑜顯出十分懊悔的樣子，喃喃地埋怨自己，不知夜裏說了什麼沒有。那人又輕聲對周瑜說：“江北有人來了。”周瑜連忙喝住，回頭又喚蔣幹，蔣幹哪敢答應，隻是蒙頭裝睡，周瑜見蔣幹在睡覺，就悄悄起床出帳，與那人密談。
過了一會，又回入帳中，喚了幾聲“子翼”，見蔣幹不應，便又上床，不一會又鼾聲如雷。
蔣幹怕周瑜天亮後知覺，連忙趁周瑜熟睡，帶上那封信，叫了小童，逃往江北，把信交給了曹操。曹操一見，勃然大怒，即刻把蔡瑁、張允喚來，假意要他們進兵，二人回答說：“水軍還未操練熟，不能貿然進攻。”曹操大喝：“待你們練熟了兵，我的腦袋已送給周瑜了！”不容分說，即把二人推出斬首。
斬完二人，曹操猛然省悟，知道中了周瑜的計了，但又不肯認錯，隻得用話推托。
周瑜施此反間計，雖並非直接在戰場上見效，但卻從此除去了兩個深通水軍之法的人，為龐統設“連環計”和黃蓋詐降火燒戰船鋪平了道路，可以說為赤壁之戰的勝利打下了很好的基礎。
赤壁之戰以後，曹操暫時退回許都，等待時機。不久，周瑜被諸葛亮氣死，東吳失了主帥，曹操大喜，便欲先取孫權，後攻劉備，但曹操又擔心大軍南征，征西將軍馬騰會趁虛來取許都，謀士苟攸獻計說：“丞相可假傳詔書，召馬騰入京，殺之了事。”曹操認為此計可行，便派人去召馬騰。馬騰見了詔書，知道是假的，但也不好說破，便使長子馬超留守西涼，並托西涼太守韓遂叔父相照應，自己帶著侄子馬岱，率兵前往許都。到了許都城外，馬騰與人密謀除掉曹操，事不機密，反被曹操知道，結果，馬騰兵敗被殺，馬岱狼狽逃回西涼，報知了馬超、韓遂。