一、試驗材料
低溫脫脂豆粕（山東禹王實業公司，大禹牌）。化學成分詳見第一篇第三章。
二、試驗設備與試劑
（一）試驗設備
DSE-25型雙螺杆擠壓機（德國Brabender食品儀器公司），詳見第一篇第二章。
高效液相色譜係統：包括Waters600E泵、Waters600E控製器、Waters millpore紫外檢測器、WH2000色譜工作站和超聲脫氣機。
（二）主要試劑
大豆苷（daidzin）、大豆苷元(daidzein)、染料木苷（genistin）和染料木黃酮(genistein)標準品購自Sigma-Aldrich公司；甲醇為色譜純，乙醇、冰醋酸為分析純。
三、試驗方法
（一）擠壓試驗
擠壓試驗操作步驟詳見第一篇第二章。
（二）大豆異黃酮含量測定
1.大豆異黃酮的提取
精確稱取試樣（經粉碎，過80目篩）0.2000g，加入80%（體積分數）乙醇10mL，超聲助溶30min，30℃下靜止6h，4500r/min離心20min。將上清液轉入玻璃試管中，密封，4℃下保存。
2.測定方法
（1）色譜條件
色譜柱：日本Nacalai公司，COSMOSIL 5C18-MS-Ⅱ柱（4.6mml.D.X250mm，5μm），流動相為甲醇∶水∶乙酸＝100∶100∶1，流速為0.6mL/min，柱溫50℃，進樣量為10μL，檢測波長254nm。
（2）標準曲線的建立
分別將1mg異黃酮標準樣品用80%乙醇溶液溶解，並定容至10mL，得到4種標準溶液。對每種標準溶液，分別準確移取不同體積的溶液於10mL容量瓶中，以80%乙醇溶液定容至10mL，配成不同濃度的標樣溶液，經HPLC測定不同濃度對應的峰麵積。以濃度對相應的峰麵積線性回歸可得4種標樣的標準曲線。將4種標樣依次以濃度x(μg/mL)對峰麵積A進行線性回歸，可得4條標準曲線，如表1-6-1。
(三)對大豆異黃酮的定性分析
依次將4種大豆異黃酮標樣以及從脫脂豆粕中提取的大豆異黃酮樣品進行色譜分析。從標準樣品色譜圖可得各組分的保留時間。
從樣品色譜圖上發現，在9.1min和12.7min時分別出現兩個明顯的峰，結合Murphy的研究結果[227]以及水解實驗，推測可知它們分別是丙二酰基大豆苷（9.1min）和丙二酰基染料木苷（12.7min）。另外，黃豆黃素、黃豆黃素苷以及乙酰基形式的糖苷均不能檢出，說明其含量甚微，在本文中均不予討論。
（四）對丙二酰基型異黃酮苷的定量分析
由於丙二酰基型異黃酮苷極不穩定，在水存在時很容易發生水解，市場上不能購到相應的標準品，因此無法通過建立相應的標準曲線來進行定量分析。王鬆開發了在特定條件下水解丙二酰基異黃酮，將其轉化為異黃酮糖苷，通過測定異黃酮糖苷的含量，再由公式推導丙二酰基型異黃酮含量，從而達到定量分析的新方法[228]。本文按照其方法進行丙二酰基型異黃酮的定量分析。考慮到豆粕提取液中隻能檢測出大豆異黃酮12種組分中的4種：大豆苷、染料木苷、丙二酰基大豆苷以及丙二酰基染料木苷。這4種異黃酮組分在水存在的條件下會發生如下水解反應：
丙二酰基大豆苷→大豆苷(1)
丙二酰基染料木苷→染料木素(2)
大豆苷→大豆苷元(3)
染料木苷→染料木素(4)
因此，可以控製水解條件，僅使反應(1)、反應(2)發生，而反應(3)、反應(4)不發生。這樣，丙二酰基型異黃酮苷就可以通過水解轉化為相應的糖苷進行定量分析。
在80℃、中性環境中，丙二酰基型糖苷的水解已經比較劇烈[229]。在相同條件下，分別對大豆苷和染料木苷的標準溶液水解8h，發現水解前後色譜圖沒有發生變化，說明在該條件下反應(3)、反應(4)不發生。因此，該條件可以作為合適的水解條件。對上述峰麵積關係進行線性回歸，代入相應糖苷標準曲線以及相對分子質量關係，結果如表1-6-3所示。
四、試驗設計與數據處理
試驗采用可旋轉的中心組合設計方法（響應麵法）設計實驗方案。詳細方案和參數設定同第一篇第二章。
應用DPS進行逐步回歸分析；應用STATISTICA6.0進行響應麵作圖。