正文 第二節 材料與方法一(1 / 3)

一、材料與設備

(一)材料與試劑

試驗材料:低溫脫脂花生粉(PF);

酰化材料:即不同琥珀酰化程度的脫脂花生粉,以低溫脫脂花生粉為原料製備;

酶解材料:即不同水解程度的脫脂花生粉,以木瓜蛋白酶水解低溫脫脂花生粉製備。

試劑:丁二酸酐,化學純,中國醫藥公司;木瓜蛋白酶(Papain),Sigma P3250;Tris Base,生物純,美國Promega corporation;十二烷基磺酸鈉(SDS),純度>95%,Sigma L5750;β-巰基乙醇(β-ME),生化純,美國Promega corporation;5,5′-二硫代雙(2-硝基)苯甲酸(DTNB),生化純,Fluka;甘氨酸,生化純,日本;丙烯酰胺,電泳級,日本;甲叉雙丙烯酰胺,純度>99%,Fluka 66670;四甲基乙二胺(TEMED),生化級,Aldrich T-22500;低分子質量標準蛋白,上海生化試劑公司。

(二)試驗設備

DSE-25型雙螺杆擠壓膨化實驗室工作站,詳細結構見第二篇第二章試驗設備部分;

2300自動定氮儀,2010半自動纖維測定儀,Soxtec Avanti 2050自動索氏總脂肪分析係統,見第二篇第二章試驗設備部分;

LXJ-IIB型低速大容量多管離心機(上海安亭);

TA-XT2i/50型物性測定儀,見第二篇第二章試驗設備部分;

LGJ-10冷凍幹燥機,見第二篇第四章試驗設備部分;

U-3010型紫外分光光度計(日本Hitachi公司);

日立S570掃描電子顯微鏡,見第二篇第二章試驗設備部分;

Bio-Rad mini 電泳儀(美國伯樂公司);

BioDoc-IT型凝膠成像分析係統(美國UVP公司);

EQUINOX 55型傅立葉紅外光譜儀(德國布魯克光譜儀器公司);

CR-400型色彩色差計(日本Minolta公司),見第二篇第二章試驗設備部分。

二、試驗方法

(一)擠壓試驗[114,117]

擠壓工藝參數:1區和5區溫度分別為80℃和70℃,3區溫度(以下稱機筒溫度)分別設定為100、120、140、150和155℃,考查不同機筒溫度下產品中蛋白質溶解度和巰基、二硫鍵含量的變化,2區和4區溫度隨3區溫度變化。物料水分50%,喂料速度10.69g/min,螺杆轉速120r/min。

添加劑(溴酸鉀和硫)以及酰化、酶水解後原料的擠壓參數:機筒溫度145℃,其他同上。

(二)花生蛋白溶解度試驗[57,34,111]

浸提溶劑:①pH7.0的磷酸鹽緩衝液(B);②pH10.0的磷酸鹽緩衝液;③pH7.0,B+0.02g/mL 2-巰基乙醇(2-ME);④pH7.0,B+0.02g/mL十二烷基磺酸鈉(SDS);⑤pH7.0,B+0.02g/mL SDS+2%(質量分數)2-ME。

蛋白質浸提:擠壓樣品於60℃下烘幹,粉碎,過80目篩網。取粉狀樣品0.5g(精確至0.1mg)各5份,分別加入10mL上述五種溶劑,常溫下攪拌浸提2h後,離心(4000r/min,10min),取上清液。沉澱中再分別加入10mL上述五種溶劑,重複浸提,離心。合並兩次上清液於50mL容量瓶中,定容,得樣品蛋白質浸提液。蛋白質含量用凱氏定氮法測定。